基因敲入小鼠是指通過基因工程的方法在目的基因位置引入特定的特變或外源基因的小鼠模型。
TurboKnockout®基因敲入小鼠
TurboKnockout®基因敲入小鼠是通過基于ES打靶技術的TurboKnockout®技術，在目的基因位置引⼊特定的突變或外源基因的小鼠模型。比如在目的基因上引入點突變（模擬人類遺傳疾病模型），或將報告基因（如EGFP，mRFP，mCherry，mYFP，或LacZ等）通過同源重組的方式引入目的基因的特定位點，從而可以通過報告基因來跟蹤目標基因的表達，也可以用報告基因取代小鼠本身的基因，使KO/KI同時發生。
TurboKnockout®基因敲入小鼠建系原則與流程：
- 去除抗性基因Neo：選擇陽性TurboKnockout® KI小鼠與野生型小鼠雜交，自刪除Neo，獲得去除打靶載體中的Neo基因的雜合子F1代小鼠。
- 再挑選⼀對雜合子F1代小鼠進行自交，通過PCR鑒定篩選得到F2代純合子KI小鼠。
CRISPR-Pro基因敲入小鼠
CRISPR-Pro基因敲入小鼠是通過CRISPR-Pro技術在目的基因位置引入特定的突變或外源基因，利用小鼠的表達調控元件指導目的基因表達。例如，將⼀個可視的標記基因（如GFP或lacZ）敲入⼀個基因位點，以取代目標基因的編碼序列，達到跟蹤該基因表達的目的。或者將⼀個標記或⼀個標簽蛋⽩敲入編碼序列的末端（少數情況下在前端）來形成⼀個融合蛋白，以達到對目標基因表達和插入位點進行檢驗的目的。
CRISPR-Pro基因敲入小鼠建系原則與流程：
通過針對靶基因設計、構建gRNA質粒并轉錄為RNA，再合成含有突變位點信息的donor oligo或donor vector，與Cas蛋白和mRNA⼀起原核顯微注射獲得測序鑒定陽性的F0代小鼠。
F0代陽性小鼠與野生型小鼠進行交配，獲得PCR和測序鑒定陽性的F1代雜合子小鼠。
選擇來⾃同⼀只F0代小鼠，敲入位點⼀致的F1代陽性小鼠，達到性成熟后進行同胞交配，可獲得F2代小鼠。對獲得的F2代小鼠進行PCR及測序鑒定，理論上，F2代小鼠中25%為敲入位點⼀致的純合子小鼠，有50%為只有⼀條染色體敲入的雜合子小鼠，有25%為野生型小鼠。
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