技術路線

1.提取總RNA

2.分離mRNA
mRNA片段化

反轉錄合成雙鏈cDNA
雙鏈DNA末端修復及3'末端加‘A' 
使用特定的測序接頭連接DNA片段兩端
Fusion聚合酶擴增構建成PCR文庫

3.成簇（Cluster）擴增

4.高通量測序（Hiseq2000）

5.生物信息學分析

 信息分析內容

1．InsertSize長度檢驗

2．比對信息統計

３．隨機性實驗檢驗圖

４．基因覆蓋度、深度統計
這項分析主要給出每個基因被Reads 覆蓋的百分比(Coverage)、堿基的平均測序深度(sequencing depth)、比對到該基因上的總Reads 數目、Uniquely 比對到該基因上的Reads 總數以及基因的描述等信息

５．基因差異表達分析
比較不同樣品間表達差異的基因，給出在每個樣品中上調/下調基因及GO分類圖形 

送樣要求

樣品濃度：總RNA樣品濃度不低于400 ng/ul，總量不低于20ug，并進行去蛋白及DNase處理。

樣品純度：總RNA樣品OD值在1.8-2.2之間，制備樣品時請不要使用LiCl沉淀。建議在條件允許情況下，提供可供兩次樣品制備的量，以保證測序的按時進行。

需提供每個樣品具體的濃度、體積、溶劑成分、制備時間以及物種來源，同時附上QC數據，可包括電泳膠圖、分光光度或者Nanodrop儀器檢測數據、Agilent Bioanalyzer儀器檢測數據等（我們要求至少要有其中一種的檢測結果），確保總RNA 28S：18S至少大于1.8。

派利來生物致力于為各大科研機構提供Illumina第二代測序平臺+個性化生物信息學分析的一站式技術服務。歷來注重開發個性化的高通量數據分析軟件，根據客戶的實驗目的，展開個性化的數據分析，能及時為客戶提供樣品測序，生物信息學分析和可供發表的圖表。派利來生物聚集了一批在生物信息學個性化數據分析領域具有多年研究經驗，并有相關期刊文章發表經歷的的多學科專業人才。開展疾病基因定位、基因突變及多態性相關分析、基因轉錄水平分析、表觀遺傳學以及全基因組測序等相關科研服務項目。