技術路線
1.從總RNA中純化分析小RNA;
2.連接RNA接頭并純化
3.合成第一鏈及第二鏈cDNA;
4.PCR擴增測序文庫;
5.在經qPCR質量檢測合格后進行Solexa高通量測序。
信息分析內容
1、 快速獲得您感興趣的細胞、組織或生物體內的miRNA種類及其豐度,并發現新的miRNA,以及不同細胞或者不同組織內的miRNA的差異表達信息。
2、 研究某種基因如何通過miRNA途徑影響該基因的表達調控和發揮其生物學功能。
3、 研究miRNA在癌癥或者其他疾病中的作用機制,并對該疾病的診斷和治療提供重要解決策略。
4、 研究miRNA在某病毒侵染和抗病毒中的作用,為有效抵抗該病毒侵染提供重要解決策略。
5、 研究miRNA在植物的正常生長,抗旱、抗逆等過程中均起著重要的生物學功能。
送樣要求
樣品濃度:總RNA樣品濃度不低于750ng/ul,總量不低于20ug,提取總RNA時請避免使用過柱法;Small RNA 樣品濃度不低于2ng/ul,且Small RNA:Total RNA≥0.3%。
樣品純度:總RNA樣品OD值在1.8-2.2之間,制備樣品時請不要使用LiCl沉淀。建議在條件允許情況下,提供可供兩次樣品制備的量,以保證測序的按時進行。
需提供每個樣品具體的濃度、體積、溶劑成分、制備時間以及物種來源,同時附上QC數據,可包括電泳膠圖、分光光度或者Nanodrop儀器檢測數據、Agilent Bioanalyzer儀器檢測數據等(我們要求至少要有其中一種的檢測結果),確保總RNA 28S:18S至少大于1.8。