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Ⅰ型單純皰疹病毒(HSV-1)載體應用廣泛,由于其獨特的優勢目前已經發展成最有前景的病毒載體之一。
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Ⅰ型單純皰疹病毒(HSV-1)載體包裝服務
Ⅰ型單純皰疹病毒(HSV-1)載體應用廣泛,由于其獨特的優勢目前已經發展成最有前景的病毒載體之一。根據HSV-1的嗜神經性且對神經細胞無任何傷害,能長期潛伏于神經元細胞中,通過LAT區潛伏表達,HSV-1載體已經成為神經系統中最有效的基因表達載體,在國外已被廣泛應用于神經系統疾病(帕金森、阿爾茨海默、慢性疼痛等)的基礎研究和藥物開發上;根據HSV-1載體對DC細胞的高轉染率并能同時裝載多個抗原基因,HSV-1載體作為基因疫苗前景非常廣闊;由于HSV-1具有廣泛的溶瘤譜,HSV-1載體是基因治療藥物的最佳候選之一,能攜帶多個治療基因;此外由于HSV-1載體的廣泛侵染性和高轉導率,其在RNA干擾研究中正發揮越來越重要的作用。
Ø 分析所使用的HSV-1載體質粒(神經系統應用中HSV-1載體質粒使用pNX01/CMV質粒,免疫系統應用中HSV-1載體質粒pB205/CMV質粒,RNA干擾應用中使用pNX01/U6質粒)的結構和多克隆位點,選定目的基因克隆所需的酶切位點;
Ø 使目的基因兩端的位點與克隆位點適配;
Ø 將目的基因插入于HSV-1載體質粒的多克隆位點中;
Ø 酶切鑒定,必要時測序。
Ø 對構建和鑒定正確的質粒進行大提制備,檢測質粒的OD260/280比值和濃度。
Ø 將載體質粒同HSV-1改構后的載體NX01基因組DNA共轉染補償細胞系,獲得陽性NX01載體。
Ø PCR鑒定陽性病毒載體,確認目的基因正確包裝到NX01載體中
Ø 擴大培養病毒、收獲、凝膠柱純化、獲得高滴度,非復制并帶有目的基因的NX01載體
我們的服務
Ø 諾賽依托HSV-1載體技術平臺,能為客戶提供HSV-1載體的基因包裝、純化、生產以及質量檢定等一系列服務,為基礎科學研究、藥物臨床前研究和臨床研究提供高滴度和高純度的HSV-1載體。
Ø 諾賽為實驗室研究者提供可用于細胞和動物實驗的研究級HSV-1載體的目的基因包裝構建和制備服務,客戶經8-10周就可獲得純化后濃度為1×108pfu/ml的含目的基因HSV-1載體。諾賽同時為藥物開發公司或機構提供臨床級HSV-1載體的生產和報檢服務,在GMP條件下為客戶生產可以用于臨床前研究(包括安全性和有效性試驗等)、藥品報檢和臨床研究的HSV-1載體制品和技術資料。
Ø 諾賽提供的HSV-1載體包裝服務的最小包裝規格為200µl、1×10^8pfu/ml,一般能滿足實驗室研究水平的體外培養實驗和動物預實驗之用,根據客戶的需求,公司也可以提供大包裝、更高滴度的產品。HSV-1載體使用方法簡單,易操作,不需要輔助病毒和復雜的實驗準備工作,客戶收到產品后即可立即開展實驗。以HSV-1載體在神經系統的應用為例,體外培養時更換培養基后直接加入HSV-1載體至MOI為1.0,對神經元細胞的轉染率一般在80%以上,8小時后即開始表達包裝入的目的基因。立體定向注射HSV-1載體至大鼠神經系統,注射5µl,12小時后即有目的基因表達,可持續觀察6周以上。
已構建產品
Ø 攜帶標記基因的HSV-1載體:NX01-GFP/RFP(用于神經系統的雙熒光標記載體),NX01-GFP(用于神經系統),NX01-LacZ(用于神經系統)
Ø 攜帶針對GFP基因的雙干擾片斷HSV-1載體:NX01-U6/H1-GFPi
Ø 攜帶功能基因的HSV-1載體:rNT3,rBDNF,rCNTF,hNGF,survivin,hNT4,hVEFGA.