慢病毒(Lentivirus) 載體是以HIV-1(人類免疫缺陷I型病毒)為基礎發(fā)展起來的基因治療載體。作為快速有效的遺傳物質投遞工具,慢病毒的應用在生物醫(yī)療研究領域已廣泛流行。
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當代基因治療研究的熱門方法是將外源基因DNA或RNA片段導入靶細胞或組織,研究靶基因的上調或抑制情況。例如,有些異常基因(癌基因、病毒基因),可通過反義核酸技術引入外源片段將其抑制;有些基因本身有治療作用,體外合成該基因導入體內使其表達豐度提高。
常用的幾種病毒載體的區(qū)別
病毒載體已成為當前基因治療載體研究的熱點,其優(yōu)勢在于:
1、病毒包裝技術經歷了多年的研究,已趨于成熟,可用于產業(yè)化大量生產
2、病毒基因組的結構簡單、分子背景比較清楚,穩(wěn)定易于改造、易于制備
3、病毒的宿主范圍廣,且具有高效的靶向特異性
4、在目的基因表達方面相對于脂質體介導的效果更明顯、長時、穩(wěn)定
5、通過載體改造的方式形成了復制缺陷型結構,安全性高
慢病毒(Lentivirus) 載體是以HIV-1(人類免疫缺陷I型病毒)為基礎發(fā)展起來的基因治療載體。作為快速有效的遺傳物質投遞工具,慢病毒的應用在生物醫(yī)療研究領域已廣泛流行。
特點
1、區(qū)別一般的逆轉錄病毒載體,它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力,常用于感染難轉染的細胞,如原代細胞、神經元細胞、干細胞、不分化細胞、心肌細胞、肝細胞、內皮細胞、腫瘤細胞,且效率近100%
2、可裝載DNA片段容量高達6kb
3、目的基因進入到宿主細胞之后,經過反轉錄,整合到基因組,形成穩(wěn)定遺傳物質,使得目的基因在細胞中可穩(wěn)定長期表達。
4、病毒載體顆粒通過包裝元件和含病毒基因組質粒共轉染包裝細胞系。利用逆轉錄機制構建自我失活(SIV)的HIV-1來源的載體,一旦轉移到靶細胞后,它就喪失了病毒長末端重復的轉錄能力,減少了產生重組病毒的機會,并避免了與啟動子干擾的問題。
綜上特點決定了其應用
用慢病毒載體攜帶目的基因比用質粒瞬時轉染更適于穩(wěn)轉株構建
載體帶有可進行高效率的包裝、轉染并穩(wěn)定整合進靶細胞的基因組中的序列元件,其產生滴度更高,為活體動物模型實驗提供高性價比的包含目的基因的病毒液
其高轉導效率及整合到基因組的特點為RNAi和cDNA 克隆以及報告基因的研究提供了一個有利的途徑
慢病毒包裝服務流程
1、制備DNA/轉染試劑復合物
2、轉染工具細胞:通常使用293T細胞
3、收獲病毒
4、去除蛋白等雜質
5、檢測滴度
服務提供
1、不少于1ml慢病毒包裝產物
2、滴度不低于108
3、提供對照載體
4、提供包含實驗過程和中間結果的詳細技術報告
注意要點
1、包裝好的病毒可以根據(jù)用戶要求感染目的細胞
2、RNA干擾慢病毒提供三條不同的shRNA序列
服務周期
3-6周