實驗原理
TUNEL染色可檢測細胞在凋亡過程中細胞核DNA的斷裂情況,其原理是標記(熒光或者生物素)的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以連接到凋亡細胞中斷裂的DNA的3‘-OH末端,再通過熒光激發或者化學顯色的方法,特異準確地檢測發生凋亡的細胞,而正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂,因而沒有3'-OH形成,很少能夠被染色。本實驗適用于組織和細胞樣本的凋亡原位檢測。
實驗方法
一、樣品處理
1、細胞樣品:自然晾干的細胞樣品固定;封閉;通透液促滲
2、冰凍樣本:PBS浸潤;封閉;通透液促滲
3、石蠟樣品:脫蠟及水化;微波或蛋白酶K修復;封閉
二、標記反應
1、熒光標記:滴加TdT酶反應液,反應;熒光顯微鏡檢測
2、生物素標記:滴加TdT酶工作液反應;滴加Streptavidin-HRP工作液反應;
DAB顯色;蘇木素復染;顯微鏡觀察拍照
實驗結果
bio-equip.com