簡介

miRNAs與靶基因的3’UTR結合后，一般功能主要表現(xiàn)為抑制mRNA的翻譯，為了檢測其效果，我們可以用Western Blot的方法檢測靶蛋白的表達水平，也可以用qRT-PCR進行檢測靶標基因的表達。但是這兩種方式都不能有效地說明是miRNAs直接起作用的結果。因此為了檢測miRNA靶標的有效性，構建Sensor reporter并進行活性檢測，才是對miRNAs與靶基因3’UTR的關系作出準確判斷的方法。

 服務優(yōu)勢

（1）采用Promega公司特有psiCHECK質(zhì)粒；

（2）所采用的Luciferase雙熒光報告系統(tǒng)，可以獲得寬泛的線性定量范圍與極高的靈敏度；

（3）采用瞬時轉(zhuǎn)染技術，操作簡便、快速，周期短，適用于絕大多數(shù)細胞類型。

服務流程

（1）PCR擴增靶基因的3’UTR，或直接合成結合位點序列；

（2）將上述確定的靶基因DNA片段克隆至報告基因載體psiCHECK質(zhì)粒；

（3）克隆miRNA表達載體；

（4）將報告載體與miRNA表達載體共轉(zhuǎn)染293T細胞；

（5）多功能酶標儀檢測報告基因的表達水平；

（6）數(shù)據(jù)分析，整理提交客戶原始數(shù)據(jù)及項目報告；

 注：為了實驗的嚴謹性，可加入靶標基因3’UTR區(qū)microRNA預測結合區(qū)域的突變體作為對照，進一步說明問題。

附：psiCHECK質(zhì)粒圖譜

漢恒生物實例：

    漢恒生物通過合成mimics，構建可能靶基因的3’UTR報告基因系統(tǒng)成功驗證miRNA與靶基因的關系。