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漢恒服務項目
漢恒生物科技(上海)有限公司提供慢病毒載體構建、RNAi(shRNA)、miRNA、過表達和干擾慢病毒包裝以及基于慢病毒技術的穩定細胞系構建服務。詳情可查詢:病毒現貨庫
整體實驗流程
(一) 實驗流程(1、2、3為并列步驟)
1. 慢病毒過表達質粒載體的構建 設計上下游特異性擴增引物,同時引入酶切位點,采用PCR技術(采用高保真KOD酶,3K內突變率為0%)從模板中(cDNA質粒或者文庫)調取目的基因CDS區(coding sequence)連入T載體。將CDS區從T載體上切下,裝入慢病毒過表達質粒載體。
2. 慢病毒干擾質粒載體的構建 合成siRNA對應的DNA頸環結構,退火后連入慢病毒干擾質粒載體。
3. miRNA載體構建從 Genomic 中調取基因相應的Mir 前體, 并在調取引物中引入酶切位點。
4. 慢病毒載體的包裝與濃縮純化 制備慢病毒穿梭質粒及其輔助包裝原件載體質粒(兩質粒包裝系統),三種質粒載體分別進行高純度無內毒素抽提,共轉染293T細胞,轉染后6 h 更換為完全培養基,培養48和72h后,分別收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液,病毒上清液通過超離心濃縮病毒。
(二)流程圖
提供產品
產品名稱 |
病毒滴度 |
規格 |
贈送陰性對照病毒規格 |
過表達慢病毒 |
>10^8 PFU/ml |
1ml |
1ml(>10^8 PFU/ml) |
干擾慢病毒 |
>10^8 PFU/ml |
1ml |
1ml(>10^8 PFU/ml) |