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漢恒生物技術工程師構建RFP-GFP-LC3雙標的腺相關病毒(AAV)載體,包裝成雙標的腺相關病毒,可在體觀察自噬,實時檢測自噬流的強弱,更加準確、清晰、直觀!
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AAV在體自噬流檢測
自噬簡介
細胞自噬(autophagy or autophagocytosis):又稱為Ⅱ型細胞死亡,是細胞在自噬相關基因(autophagy related gene,Atg) 的調控下利用溶酶體降解自身受損的細胞器和大分子物質的過程。
目前根據發生過程分為三類:Macroautophagy,Microautophagy和Chaperone-mediated autophagy CMA)。
大自噬(Macroautophagy):即我們說的自噬(autophagy);
微自噬(Microautophagy):是指溶酶體主動、直接吞噬胞漿成分的一種方式;
分子伴侶介導的自噬 (Chaperone-mediated autophagy,CMA):一些分子伴侶,如hsp70,能幫助未折疊蛋白轉位入溶酶體。通常說的自噬泛指Macroautophagy.
自噬的過程
1):細胞接受自噬誘導信號后,在胞漿的某處形成一個小的類似“脂質體”樣的膜結構,然后不斷擴張,被稱為Phagophore。
2):Phagophore不斷延伸,將胞漿中的任何成分,全部攬入,然后“收口”,成為密閉的球狀的autophagosome,即“自噬體”。
3):自噬體形成后,可與細胞內吞的吞噬泡、吞飲泡和內體融合(這種情況不是必然要發生的)。
4):自噬體與溶酶體融合形成autolysosome,期間自噬體的內膜被溶酶體酶降解,2者的內容物合為一體,自噬體中的“貨物”也被降解,產物(氨基酸、脂肪酸等)被輸送到胞漿中供細胞重新利用,而殘渣或被排出細胞外或滯留在胞漿中。
圖1. 自噬的過程圖
最有效的在體自噬流檢測工具:AAV-mRFP-GFP-LC3
漢恒生物技術工程師構建RFP-GFP-LC3雙標的腺相關病毒(AAV)載體,包裝成雙標的腺相關病毒,可在體觀察自噬,實時檢測自噬流的強弱,更加準確、清晰、直觀!彌補了LC3自噬雙標腺病毒在體轉染的缺陷,并且可根據組織器官的親和性,選擇不同的AAV血清型,是最有效的載體自噬流檢測工具!
圖2. AAV-mRFP-GFP-LC3指示載體腦組織自噬流
(Cell Death Dis.2013 Nov 14;4:e917)
AAV載體不同血清型
研究發現 AAV 具有多種血清型,各種不同血清型的 AAV 載體的主要區別是衣殼蛋白不同,因此對不同的組織和細胞的轉染效率存在差異。目前漢恒生物在包裝腺相關病毒時有12 中不同的 AAV 血清型可供客戶選擇,建議客戶針對不同組織器官選擇相應血清型的 AAV 病毒,見表 1。
表1.12種不同血清型AAV對各組織器官細胞的親和性
血清型 |
組織親和性 |
AAV1 |
肌肉,心臟,骨骼。òㄐ募。,神經組織 |
AAV2 |
中樞神經,肌肉,肝臟,腦組織,眼, |
AAV3 |
肌肉,肝臟,肺,眼 |
AAV4 |
中樞神經,肌肉,眼,腦 |
AAV5 |
肺,眼,中樞神經,關節滑膜,胰腺 |
AAV6 |
肺,心臟 |
AAV7 |
肌肉,肝臟 |
AAV8 |
肝臟,眼,中樞神經,肌肉 |
AAV9 |
心臟,肌肉,肺(肺泡),肝臟,中樞神經 |
DJ |
肝臟,視網膜,肺,腎臟 |
DJ/8 |
肝臟,眼,中樞神經,肌肉 |
Rh10 |
肺, 心臟,肌肉,中樞神經,肝臟 |
AAV其他相關特色服務
1. 腺相關病毒AAV包裝服務
2. 在體敲除AAV-SaCas9包裝服務
3. AAV光遺傳技術服務