簡介

    細胞增殖是生物體的重要生命特征，細胞以分裂的方式進行增殖。細胞增殖是生物體生長、發育、繁殖、遺傳的基礎，是細胞最基本的生理活動。方法有流式PI檢測、Ki67法等。漢恒生物為您提供全方位的細胞增殖實驗服務。

Cellcycle 流式細胞檢測實驗

    通常利用通常用PI染細胞核，PI在一定波長的光下發出熒光，其強度與DNA含量成正比。綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白及其它發光基團也可作為標記物，分選細胞。

實驗步驟：

（1）將細胞以1×106接種于60mm培養板，80％匯合后轉染。

（2）24小時后在新鮮培養液中加入適當的抗生素（真核表達載體上的抗性標記）進行培養（該步可選）。

（3）48－72小時后用胰酶消化收集細胞，PBS洗兩遍，棄上清，加入1ml 70％預冷乙醇中，吹打均勻，4℃固定12小時以上。

（4）PBS洗滌去乙醇，1000rpm, 5min，洗兩遍。

（5）0.5 mlPBS重懸細胞，加入PI和 RNaseA至終濃度50µg/ml，37℃ 溫浴30 min。

（6）用流式細胞儀測定周期。

PI：碘化丙啶，以PBS配成1mg/ml，4℃保存。

RNaseA：10mg/ml

Ki67免疫熒光實驗

    增殖細胞核抗原Ki-67是一種與細胞周期相關的蛋白質。 Ki-67抗原是目前多種惡性腫瘤尤其是乳腺癌研究中的熱門生物指標，可以通過Ki-67抗原的檢測，了解惡性腫瘤的細胞增殖活性。腫瘤增殖Ki67表達范圍覆蓋除G0 期以外的各增殖周期細胞。研究結果提示PCNA 和Ki67 均可較好地用于檢測乳腺癌組織中的增殖細胞，二者基本可以互為代替使用。由于Ki67 在G0 期以外各增殖周期均有表達，更具可用性。兩者具有一定的互補性。Ki-67在低分化腺癌組織中的表達較在中高分化腺癌組織的表達明顯升高，表明Ki67 染色陽性程度與組織學分級的相關性。表明Ki67表達與乳腺癌發生、發展有關,是一個不良預后因素，對乳腺癌的診斷治療及預后評價有重要的參考價值。

實驗結果圖：