簡介

MicroRNAs（miRNAs）是一種小的內源性非編碼RNA分子，大約由21－25個核苷酸組成。這些小的miRNA通常靶向一個或者多個mRNA，通過翻譯水平的抑制或直接降解靶標mRNAs而調節基因的表達。

miRNAs起源于內源性表達轉錄本，廣泛存在于線蟲、果蠅、植物、哺乳動物等眾多生物體中。

miRNA途徑開始于一個miRNA基因的pri-miRNA（PrimarymiRNA）轉錄本；這個70－100nt的發卡RNAs（pri-miRNA）在核內被核糖核酸酶Drosha加工處理而最終成為pre-miRNA（Precursor miRNA）；之后pre-miRNA被核輸出蛋白exportin 5轉運入胞質，接著被第二個核糖核酸酶Dicer消化為21－25nt的miRNA；這個階段的miRNA可以結合RISC（RNA-Induced Silencing Complex）并與靶標mRNA互補并列；miRNA和靶序列的互補程度決定了靶基因mRNA在翻譯水平被部分抑制或被直接降解。

植物體中，促進靶mRNA降解是主要的工作方式，而哺乳動物中則以翻譯水平的抑制為主要方式。

microRNA的表達檢測

由于miRNAs在眾多程序的調控，諸如發育、細胞增殖和凋亡以及腫瘤發生相關等領域發揮作用，因此miRNAs的鑒定和定量研究成為迅速發展的研究領域。miRNA的發現可以通過克隆特定組織、細胞或者某個生物體特定發育階段的miRNA并測序完成。microRNA芯片或qPCR的檢測方法比較簡單，可以快速的對定量已知的miRNA表達差異。

1、microRNA 芯片服務

Agilent Technologies Inc.開發出具有獨特設計的miRNA檢測芯片，能特異性地檢測出成熟的miRNA并能很好地區分高度同源的miRNA 分子。該平臺還具有特異性高、靈敏度高等特點。可以廣泛地應用于檢測和比較各類樣品的miRNA表達狀態，并通過分析其調控的靶基因來深入分析其調控機制或生物學功能。

作為miRNA芯片的后起之秀，Agilent miRNA芯片自上市之初就受到業界廣泛關注，上市兩年來，其優異的性能指標更是獲得科研工作者的廣泛認可，2009年穩占國內市場應用第一名。

Agilent microRNA芯片技術特點：

1. 唯一能通過特殊的探針設計區分成熟miRNA和miRNA前體的芯片平臺；

2. 無需分離miRNA，直接用Total RNA 進行實驗，只需100ng的Total RNA 即可用來進行標記實驗，避免了分離、富集、放大等過程帶來的影響； 

3. 樣品適用范圍廣：組織、血清、血漿、FFPE、冰凍切片組織、脫落細胞等均可進行實驗；

4. 高特異性：特殊的專利探針設計能區別一個堿基的差異； 

5. 高靈敏度：檢測豐度跨4個log，最高可達6個log，只要存在6000個拷貝的分子就可以檢出。

2、qPCR檢測microRNA的表達

對于檢測較少幾種miRNA的表達差異通常采用Real-Time PCR的來對miRNA進行檢測，其具有快速、特異性強、靈敏度高等優點。

工作原理 ：

莖凸環結構的逆轉錄引物能與miRNA 3'端部分結合，在逆轉錄酶的作用下進行逆轉錄反應，然后特異的正反向引物和SYBR Green熒光染料共同參與的定量PCR反應體系，實現對逆轉錄產物進行定量檢測。

檢測優點：

• 檢測簡便、快捷、節約：miRNA qPCR Detection System是基于SYBR Green染料法的qPCR檢測系統，可用于從一個合成反應的cDNA中檢測多種miRNAs。

• 檢測的特異性：獨特的miRNA引物設計技術及其優化的反應體系避免了轉染質粒的污染 

• 檢測分辨率高：該系統能分辨單堿基差異的miRNA。 

• 檢測靈敏度高：可在低至pg級的總RNA中檢測到特異表達的miRNA。

漢恒生物科技（上海）有限公司[簡稱漢恒生物]是一家專門從事生物技術服務和產品銷售與研發的高科技企業，公司專注于為廣大科研工作者提供腺病毒、慢病毒、逆轉錄病毒包裝、細胞穩定株篩選、siRNA設計和microRNA研究服務。漢恒生物科技（上海）有限公司[簡稱漢恒生物]自成立之日起，就以“為客戶提供最優質的服務和品質卓越的產品”為宗旨，憑借國際先進的實驗設備和經驗豐富的實驗技術人員，獲得了中國頂級病毒包裝供應商的美譽，是全國唯一一家可以提供病毒現貨的公司。漢恒生物科技（上海）有限公司[簡稱漢恒生物]提供的產品和服務具有產品質量好、滴度高、服務優及周期短等特點。