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漢恒獨家推出雙熒光LC3細(xì)胞自噬腺病毒
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自噬簡介
細(xì)胞自噬(autophagy or autophagocytosis)：又稱為Ⅱ型細(xì)胞死亡，是細(xì)胞在自噬相關(guān)基因(autophagy related gene，Atg)的調(diào)控下利用溶酶體降解自身受損的細(xì)胞器和大分子物質(zhì)的過程。
比利時科學(xué)家Christian de Duve在上世紀(jì)50年代經(jīng)過電鏡察看到自噬體（autophagosome）構(gòu)造，并且在 1963 年溶酶體國際會議上首先提出了“自噬”這種說法。因而Christian de Duve被公以為自噬研討的鼻祖。Christian de Duve 也因發(fā)現(xiàn)溶酶體，于1974年取得諾貝爾獎。
目前根據(jù)發(fā)生過程分為三類：Macroautophagy，Microautophagy和Chaperone-mediated autophagy CMA)。
大自噬（Macroautophagy）：即我們說的自噬（autophagy）;
微自噬（Microautophagy）：是指溶酶體主動、直接吞噬胞漿成分的一種方式;
分子伴侶介導(dǎo)的自噬 (Chaperone-mediated autophagy，CMA)：一些分子伴侶，如hsp70，能幫助未折疊蛋白轉(zhuǎn)位入溶酶體。通常說的自噬泛指Macroautophagy.
自噬的過程
1）：細(xì)胞接受自噬誘導(dǎo)信號后，在胞漿的某處形成一個小的類似“脂質(zhì)體”樣的膜結(jié)構(gòu)，然后不斷擴張，被稱為Phagophore。
2）：Phagophore不斷延伸，將胞漿中的任何成分，全部攬入，然后“收口”，成為密閉的球狀的autophagosome，即“自噬體”。
3）：自噬體形成后，可與細(xì)胞內(nèi)吞的吞噬泡、吞飲泡和內(nèi)體融合（這種情況不是必然要發(fā)生的）。
4）：自噬體與溶酶體融合形成autolysosome，期間自噬體的內(nèi)膜被溶酶體酶降解，2者的內(nèi)容物合為一體，自噬體中的“貨物”也被降解，產(chǎn)物（氨基酸、脂肪酸等）被輸送到胞漿中供細(xì)胞重新利用，而殘渣或被排出細(xì)胞外或滯留在胞漿中。
自噬的調(diào)控
1、依賴mTOR（哺乳動物雷帕霉素靶點）途徑的自噬
1）PI3K-AKT-mTOR信號通路
2）AMPK-TSC 1/2-mTOR 信號通路
2、其它的信號通路
1）3-甲基腺嘌呤（3-MA）通過抑制Class Ⅲ PI3K的活性抑制自噬。
2）beclin1和UVRAG作為正調(diào)控子，抗凋亡因子bcl-2作為負(fù)調(diào)控子共同參與組成Class Ⅲ PI3 復(fù)合物調(diào)控自噬。
3）GTP結(jié)合的G蛋白亞基Gαi3抑制自噬；GDP結(jié)合的Gαi3蛋白活化自噬。
4）死亡相關(guān)蛋白激酶（death-associated protein linase,DAPK）和DAPK相關(guān)蛋白激酶（DAPK-related protein kinase-1,DRP-1）誘導(dǎo)自噬。
5）PKA、casein激酶 Ⅱ、MAP激酶、calcium途徑也在自噬錯綜復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)格中，但其機制還不甚清楚。
自噬與疾病
1、自噬與代謝
自噬能清除不正常構(gòu)型的蛋白質(zhì)，并消化受損和多余的細(xì)胞器，是真核細(xì)胞中廣泛存在的降解/再循環(huán)系統(tǒng)。在細(xì)胞新陳代謝、結(jié)構(gòu)重建、生長發(fā)育中起著重要作用。在饑餓和新生兒早期，自噬作用明顯加強，自噬體顯著增多。
2、自噬與腫瘤
細(xì)胞自噬與腫瘤的關(guān)系十分復(fù)雜，目前尚未完全闡明。一方面，正常細(xì)胞自噬增強，可表現(xiàn)出抑制腫瘤發(fā)生的功能；與此相反，抑制細(xì)胞自噬有潛在的致瘤可能。另一方面，腫瘤細(xì)胞也可通過增強細(xì)胞自噬來對抗由缺氧、代謝產(chǎn)物、治療藥物誘導(dǎo)的應(yīng)激反應(yīng)。
漢恒自噬產(chǎn)品與服務(wù)
自噬抑制劑
1）3-Methyladenine（3-MA）：（Class III PI3K） hVps34 抑制劑
2）Bafilomycin A1：質(zhì)子泵抑制劑
3）Hydroxychloroquine（羥氯喹）
自噬相關(guān)抗體
1）A14292,Premo自噬TB/ GFP TR-FRET LC3B抗體試劑盒
2）Anti-MAP1A/LC3A/B 自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體
3）Anti-MAP1LC3A(microtubule-associated protein 1 light chain 3) 自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體
4）兔抗人、大、小APG4B細(xì)胞自噬相關(guān)抗體\ Anti-APG4B/AUTL1
5）自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體\ Anti-MAP1LC3A
6）Anti-SQSTM1 / p62 antibody
漢恒生物已開發(fā)并完善了多套自噬相關(guān)的研究體系和工具,并積累了豐富的自噬研究經(jīng)驗
漢恒獨家推出雙熒光LC3細(xì)胞自噬腺病毒
雙熒光指示體系：漢恒生物科技（上海）有限公司已開發(fā)出用于產(chǎn)品。
mRFP 用于標(biāo)記及追蹤LC3，GFP 的減弱可指示溶酶體與自噬小體的融合形成自噬溶酶體，即由于GFP 熒光蛋白對酸性敏感，當(dāng)自噬體與溶酶體融合后GFP 熒光發(fā)生淬滅,此時只能檢測到紅色熒光。
我們在顯微鏡成像后紅綠熒光merge后通過merge后出現(xiàn)的黃色斑點即只是自噬體.紅色的斑點指示自噬溶酶體,通過不同顏色斑點的計數(shù)可以清晰的看出自噬流的強弱。
如下圖:細(xì)胞轉(zhuǎn)染mRFP-GFP-LC3病毒后給予氨基酸剝奪處理2小時后出現(xiàn)明顯增強的自噬以及自噬流。
紅色斑點是自噬溶酶體（mRFP），黃色斑點是自噬體（RFP+GFP）. 通過不同顏色斑點的計數(shù)可以清晰看出自噬流的強弱，實時監(jiān)測自噬發(fā)生過程，準(zhǔn)確，清晰，直觀！
參考文獻(xiàn)
1、Histone deacetylase 4 selectively contributes to podocyte injury in diabetic nephropathy；
(Kidney International , (9 April 2014) | doi:10.1038/ki.2014.111)
（2014年發(fā)表于Kidney International，2013年影響因子7.916，通訊作者E-mail： fanyi@sdu.edu.cn）
2、MicroRNA-216b/Beclin 1 axis regulates autophagy and apoptosis in human Tenon's capsule fibroblasts upon hydroxycamptothecin exposure
（Experimental Eye Research，DOI: 10.1016/j.exer.2014.03.008）
（2014年發(fā)表于Experimental Eye Research，2013年影響因子3.017，通訊作者E-mail：zhilanyuan@vip.sina.com ybge@njmu.edu.cn ）
3、Interleukin-1β induces autophagy by affecting calcium homeostasis and trypsinogen activation in pancreatic acinar cells；
（Int J Clin Exp Pathol， 2014; 7(7): 3620–3631.）
（2013年發(fā)表于International Journal of Clinical & Experimental Pathology，2013年影響因子1.783，通訊作者E-mail： nc.ude.ummf@xqgnef ; nc.ude.ummf@cqoahz)
