文章來源于：SinoTalk為承諾發聲，作者： 王哲新 
 
TIL療法最初由Rosenberg團隊在1986年開始研發。該療法的前提是從患者的腫瘤中提取被稱為TILs的免疫細胞，在實驗室中培養和擴增這些細胞，然后將它們重新引入患者體內以靶向并摧毀癌細胞。TIL療法通過識別癌癥新抗原，激活T細胞免疫反應來根除腫瘤細胞（這被稱為“細胞毒性”）。這種精準醫療方法提高了反應率和緩解的機會，這在腫瘤學領域無疑是一場革命。
在過去的幾十年里，大量的研究工作一直致力于擴大腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)和T細胞的技術發展，以及臨床程序的制定。TIL療法已經發展到了獲得批準上市的階段——Iovance公司的lifileucel已經獲得FDA的批準上市。還有一些關鍵領域需要進一步發展，包括對其效力的評估，增強對“熱”和“冷”癌癥的臨床療效，優化制造過程，降低總體生產成本，以及提高這種方式的可及性。
為了成功地將TIL療法納入臨床實踐，有必要擴大其在嚴重未滿足醫療需求的實體腫瘤類型中的治療應用，建立最佳的治療程序臨床方案，簡化生產流程，并進行相關的臨床試驗。此外，下一代TIL療法的持續研究已經在進行中，實際世界數據的積累將有助于促進和證實這一領域的進一步發展。
TIL在實體癌治療中相對于CAR-T和TCR-T的優勢
過繼細胞療法(ACT)代表了癌癥治療的一個動態前沿，利用免疫系統的潛力來靶向和殺死腫瘤細胞。這種方法包括多種策略，包括腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)、表達新型T細胞受體(TCR)的基因修飾T細胞和嵌合抗原受體(CAR)。這些療法在各種腫瘤類型中顯示出相當大的前景，并且在世界范圍內進行了多項臨床試驗以進一步優化這種治療方式。
CAR-T療法在治療血液系統惡性腫瘤，如b細胞急性淋巴細胞白血病(ALL)、某些類型的非霍奇金淋巴瘤和白血病方面顯示出顯著的療效和成功。多種CAR-T產品已獲得監管部門批準，并在臨床應用中取得巨大成功。然而，CAR-T療法有幾個相當大的局限性:(1)它伴有嚴重的副作用，如細胞因子釋放綜合征(CRS)、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)和神經毒性;(2) CAR-T療法對血癌療效顯著，然而其治療實體瘤的有效性仍然很差。
TCR-T療法在靶向多種實體瘤方面顯示出潛力。它可以針對特定的腫瘤抗原進行定制，包括來自MHC分子呈遞的細胞內蛋白的抗原，使其更適合靶向實體瘤。事實上，它已經顯示出治療實體瘤而不是血癌的臨床療效，正如許多關于TCR-T療法的研究和評論文章所討論的那樣。FDA已批準來自Adaptimmune 公司的TCR-T細胞療法的產品上市。TCR-T療法的局限性包括：（1）當前領域缺乏非常特異性的抗原靶標，（2）當誘導脫靶毒性（即TCR識別正常組織中表達的抗原）時，除了CRS和神經毒性外，還有潛在的致命副作用，（3）HLA限制——需要匹配HLA類型才能使α-βTCR發揮作用，（4）制造過程可能很復雜。
TIL療法可以用于治療多種癌癥類型。它依賴于從患者的腫瘤中提取免疫細胞。TILs浸潤到腫瘤部位，因此，這些細胞已經將腫瘤識別為外來抗原。通過分離和擴增，這些TIL可用于精確靶向和攻擊癌細胞。TIL是從患者自身的腫瘤中提取的。因此，它是針對每位患者量身定制的。這最大限度地降低了通常與同種異體治療相關的排斥反應或移植物抗宿主病（GVHD）的風險。
TIL療法雖然通常耐受性良好且平安無事，但確實存在相關風險和潛在副作用。輸注后可立即導致一過性呼吸困難、寒戰和發熱。這些不良事件（adverseevents，AEs）通常與血清循環細胞因子水平升高無關，不應與細胞因子釋放綜合征混為一談，后者常見于其他細胞療法，如嵌合抗原受體（chimericantigenreceptor，CAR）T細胞療法。TIL療法針對多種實體瘤進行了研究，包括黑色素瘤、宮頸癌、肺癌、乳腺癌以及最近的胃腸癌。這使其成為一系列癌癥類型的潛在有價值的治療選擇。
TIL療法的局限性包括：（1）目前TIL療法的制造過程是勞動密集型、耗時且昂貴的，以及（2）難以獲得腫瘤組織，尤其是在晚期癌癥患者中。
綜上所述，CAR-T細胞療法最適合血液系統惡性腫瘤，TCR-T細胞療法對實體瘤顯示出前景，而TIL療法目前對黑色素瘤和潛在的其他實體瘤最有效。作為新興的基于T細胞的方式，所有這些都提供了有前途的癌癥治療方法，每種方法都有自己的優點和缺點。應根據癌癥類型、患者的醫療狀況和醫療機構的治療可用性等因素仔細選擇特定的免疫治療方法。了解每種療法的獨特優勢和局限性可以指導它們在臨床實踐中的應用，以最大限度地提高患者的預后。
TIL療法的最新臨床進展
近年來，隨著TIL療法發展到一定的成熟水平，許多臨床試驗正在進行中。由學術團體或生物技術公司領導的近50項試驗正在進行中，針對免疫學上“熱”實體瘤和最近的“冷”實體瘤，詳情請見下附表。
 
 
TIL療法的技術發展
下圖1展示了下一代腫瘤浸潤性淋巴細胞（TIL）制備的流程概覽。首先，從新鮮切除的腫瘤組織中分離出TIL，然后在體外進行培養。在A部分，基于表達標記（如CD39+/CD103+、PD-1、CD39-/CD69-和4-1BB）選擇對腫瘤有反應的T細胞。在B部分，將腫瘤組織在4-1BB和OX40等抗體的存在下進行培養，以誘導高效能的TIL。在C部分，對TIL進行遺傳修飾，以增強其功能，這可能包括通過轉導技術引入新的基因或改變現有基因的表達，從而提高TIL對腫瘤細胞的識別和殺傷能力。這一流程旨在優化TIL療法，使其更加精準和有效。
 
Tumor-reactive TIL selection：在快速擴增程序（REP）之前，基于干擾素-γ（IFN-γ）對腫瘤反應性TIL進行預選。在Rosenberg等人的研究中，通過與自體腫瘤細胞或癌細胞系共培養，篩選出表達IFN-γ的TIL，用于ACT治療，顯示了在轉移性黑色素瘤患者中49%的客觀反應率。
Young TILs：這種方法通過酶消化腫瘤來分離 TILs，減少初始擴增期，直接從腫瘤中分離TIL并進行擴增，而不是等待它們從腫瘤碎片中遷移出來。這些“Young TILs”顯示出較長的端粒和更高水平的CD27和CD28表達，與從碎片擴增的TIL相比，它們在轉移性黑色素瘤患者中顯示出更好的臨床反應。在一項研究中，20名轉移性黑色素瘤患者中有10名（50%）實現了客觀臨床反應，即2例完全緩解和8例部分緩解（無進展生存期為3至18個月）。
Neoantigenreactive TILs：過去幾十年的技術進步使新抗原反應性和高效TIL的發展成為可能，它被認為是“下一代TIL療法”。通過將10種轉移性人類腫瘤（包括乳腺癌、黑色素瘤和結腸癌）的55種新抗原特異性TCR克隆型（NeoTCR）映射到它們的單細胞轉錄組，Lowery等人確定了CD8+和CD4+新抗原反應性TIL的特征。新抗原特異性TIL表現出腫瘤特異性克隆擴增。Achilles Therapeutics開發了VELOSTM制造工藝，通過將TIL與對應于患者已鑒定新抗原的自體樹突狀細胞負載肽共培養，選擇性地擴增克隆新抗原特異性TIL（cNeT）。通過單細胞測序技術，能夠識別出特異性針對腫瘤新抗原的TIL，并在臨床研究中去驗證這些新抗原特異性T細胞在TIL中的持久性。
Phenotypicmarkers:近年來的各種技術發展使研究人員能夠根據表型標志物識別和分選腫瘤反應性TIL，例如程序性細胞死亡1（PD-1）、CD39-/CD69-和CD39+/CD103+。這些富集策略將提高臨床療效，需要進一步開發臨床生產和臨床研究。
Highpotency TIL induction: TIL 的有效擴增對于生產和成功的臨床效果至關重要。研究表明，通過添加激動劑抗體（如4-1BB抗體）可以改善TIL的擴增，并在體外和體內增強其對腫瘤的反應性。
 
Engineering TIL：使用基因工程技術對TIL進行工程化改造，包括增強抗腫瘤活性、提高體外擴增效率、減少TIL的抑制和耗竭，以及降低IL-2毒性等。可以使用包括CRISPR基因編輯和轉導TIL使用慢病毒平臺等技術。
下圖2展示了下一代TIL（腫瘤浸潤性淋巴細胞）治療策略的兩個關鍵機制。A部分描述了通過CRISPR/Cas9技術敲除TGFBR2基因，這種敲除可以使T細胞對TGF-β（轉化生長因子-β）介導的免疫抑制產生抗性，從而增強T細胞的效應功能、抗腫瘤活性、增殖和持久性，同時減少調節性T細胞（Treg）的形成。B部分介紹了IL-15/IL-15Rα復合物，稱為IL-15超激動劑（sIL-15），它顯著增強了IL-15的生物活性。通過將sIL-15與αPD-1抗體的Fc結構域結合，可以隱藏sIL-15與IL-15Rβ的結合，同時將sIL-15直接錨定在PD-1+CD8+ T細胞上，并激活這些細胞。這種策略旨在降低毒性，同時保持治療效果，通過局部增強T細胞的活性來對抗腫瘤，而不是通過系統性地增加IL-15水平，這樣可以減少可能的副作用。
 
毫無疑問，TIL療法和任何突破性的醫學進步一樣，都面臨著挑戰。治療過程的復雜性、人體免疫系統、涉及的大量費用以及潛在的不良反應需要不斷的審查和改進。然而，醫學界對克服這些障礙的承諾令人鼓舞，使人們相信TIL治療將繼續發展成為現代癌癥治療的基石。
總之，TIL療法是通往更有效、更個性化、更富有同情心的癌癥治療之路。最近對TIL治療的研究帶來了有希望的進展，解決了該領域的關鍵挑戰。通過加強TIL的選擇，克服抑制性TME，以及基因工程的策略應用，研究人員正在顯著提高TIL治療的療效和持久性。雖然TIL治療在臨床應用的道路上仍然面臨障礙，但該領域的快速進展為癌癥免疫治療的未來帶來了巨大的希望。科學家、臨床醫生和生物技術公司之間持續的研究努力和合作對于改進TIL治療并加速其轉化為臨床實踐是絕對必要的，最終使全世界的癌癥患者受益。
 
TIL療法最強輔助IL-2作用
在 TIL 療法中，IL - 2（白細胞介素 - 2）發揮著至關重要的作用，主要包括以下幾個方面：
促進 TIL 細胞增殖：IL - 2 可以與 TIL 細胞表面的受體結合，向細胞內傳遞增殖信號，刺激 TIL 細胞分裂和復制，從而使 TIL 細胞的數量快速增加。在 TIL 療法中，從腫瘤組織中提取的 TIL 細胞數量往往有限，通過 IL - 2 介導的增殖作用，可以獲得足夠數量的具有腫瘤殺傷活性的細胞，用于回輸治療。
增強 TIL 細胞的活性和殺傷能力：IL - 2 能夠激活 TIL 細胞內的一系列信號通路，促進細胞合成和分泌細胞毒性分子，如穿孔素、顆粒酶等，這些分子可以直接作用于腫瘤細胞，導致腫瘤細胞的凋亡和死亡。同時，IL - 2 還可以增強 TIL 細胞表面受體的表達，提高 TIL 細胞對腫瘤抗原的識別和結合能力，增強其對腫瘤細胞的特異性殺傷作用。
維持 TIL 細胞的存活：在體外培養和擴增過程中，TIL 細胞會面臨營養缺乏、氧化應激等不利因素的影響，容易發生凋亡和死亡。IL - 2 可以通過抑制細胞凋亡信號通路，促進抗凋亡蛋白的表達，從而延長 TIL 細胞的存活時間，提高細胞培養的成功率和質量。
 
總之，IL - 2 在 TIL 療法中對于 TIL 細胞的增殖、活化和存活都起著關鍵的支持作用，是該療法成功實施的重要因素之一。
 
IL-2在TIL療法中的局限
盡管IL - 2在TIL療法中發揮了重要作用，但也存在一些缺點：
系統毒性：在使用IL - 2來促進TIL細胞增殖和活化的過程中，由于IL - 2的全身性作用，可能會引起一系列全身毒性反應。例如，可導致血管滲漏綜合征，表現為低血壓、水腫、漿膜腔積液等癥狀。此外，還可能引發發熱、寒戰、疲勞、惡心、嘔吐、腹瀉等全身性癥狀，嚴重情況下可能會影響患者的生活質量，甚至危及生命。比如有些患者在接受高劑量IL - 2治療后，出現了嚴重的低血壓和全身性水腫，需要住院進行支持治療。
 
免疫調節失衡：IL - 2不僅可以激活TIL細胞，還可能對其他免疫細胞產生影響，造成免疫調節失衡。例如，它可能促進調節性T細胞（Treg細胞）的增殖和活化，而Treg細胞會抑制免疫反應，從而在一定程度上削弱TIL細胞的抗腫瘤效果。在某些實驗中發現，高劑量的IL - 2雖然增加了TIL細胞的數量，但同時也使Treg細胞增多，導致腫瘤的抑制效果沒有達到預期。
 
劑量控制困難：要達到理想的TIL細胞增殖和活化效果，IL - 2的劑量需要精準控制。劑量過低可能無法有效刺激TIL細胞增殖和活化；劑量過高則可能引發嚴重的毒副作用。但由于個體差異和腫瘤微環境的復雜性，確定合適的IL - 2劑量具有一定的挑戰性。比如在臨床實踐中，不同患者對于相同劑量的IL - 2反應差異很大，有些患者需要反復調整劑量才能達到理想效果。
 
逐典高活性偏向性IL-2
逐典生物研發團隊具有十多年跨國公司工作經驗，在蛋白分子結構設計方面具有極其豐富的經驗，曾將多個蛋白新分子藥物推至臨床階段。逐典生物研發團隊憑借專有的蛋白設計平臺，開發出具有偏向性的IL-2，通過改變與α、β和γ三種不同受體的親和力實現優先高效激活CD8+T細胞或者高效優先激活Treg細胞。不論通過展示在免疫細胞表面，抑或是從人體分離相關免疫細胞中使用，偏向型IL-2的使用會更有效地滿足細胞藥物研發需求
 
下面以逐典生物IL-2 AID為例，展示其優先激活Treg細胞的相關數據（其他更多偏向性細胞因子信息，歡迎聯系技術熱線15951985773）。
 
 
圖1. IL-2 AID分子更易使穩定表達有αβγ受體的細胞增殖
 
 
 
 
圖2. 體外刺激人PBMC結果顯示，IL-2 AID分子可以優先刺激Treg增殖，與IL-2 WT相比，CD8+ T和Treg ED50差值明顯增大
 
【關于逐典】
 
上海逐典生物科技有限公司，坐落于中國（上海）自由貿易試驗區，獲得ISO9001質量體系認證，是一家從事重組蛋白研發和銷售的高新科技企業。
逐典生物始終秉持以客戶為中心的理念，針對重組蛋白的結構設計、純化工藝及其穩定劑型相關的多項關鍵技術進行優化。專業定向蛋白變復性技術，可將大腸桿菌大量表達的變性固體蛋白轉變成高活性可溶性蛋白。憑借技術優勢，逐典生物新品研發周期短且可控性強，為重組蛋白的高質高效研發提供保障，為企業生產降本增效。
公司自成立以來成功開發百余種高活性細胞因子及多種高活性蛋白酶，覆蓋細胞培養、病毒純化以及質量分析等生物工藝各個環節。可廣泛應用于科研、醫藥生產及IVD（體外診斷試劑）等領域，滿足各類用戶所需。