在現代生命科學研究中,基因編輯技術的選擇對實驗結果的可靠性和效率至關重要。現在常用的CRISPR/Cas核酸酶技術獲得基因編輯小鼠,從打靶載體構建——受精卵顯微注射——獲得F0小鼠——獲得F1雜合子小鼠——獲得F2純合子小鼠,周期往往需要9-12個月,其中從F0到F2純合子小鼠的周期約6個月。在科學研究領域,時間往往意味著競爭力,高效的實驗技術和流程是科研成功的關鍵因素。
F0代純合子小鼠的安全風險
相較于傳統的ES打靶技術,CRISPR/Cas核酸酶介導的基因編輯小鼠無需經歷ES細胞電轉和篩選,直接將打靶載體注射到受精卵可獲得陽性Founder鼠(F0)。但F0代小鼠具有較高的嵌合比例,因為核酸酶技術在受精卵階段進行基因編輯,常常發(fā)生在受精卵的1細胞、2細胞甚至4細胞期,基因編輯也存在隨機性。這導致不同F0代小鼠之間的基因型不一致,且同一只F0代小鼠也可能有多種基因型嵌合。
雖然調整注射濃度可能會得到少量所謂的純合子F0代小鼠,但直接用于實驗的話穩(wěn)定性較差,難以提供一致的實驗結果,且可提供的小鼠數量有限,因此仍然需要至少2代繁育。
新一代ES基因編輯技術TurboKnockout®
賽業(yè)生物在傳統ES打靶技術的基礎上,研發(fā)出了升級版的TurboKnockout®基因編輯技術,利用優(yōu)化的純合ES克隆打靶體系,可篩選基因敲除、敲入、點突變的純合ES細胞,該技術結合了囊胚前注射和四倍體補償技術進行顯微注射,周期快至3個月,可大批量獲得基因一致的純合子小鼠。
TurboKnockout®技術優(yōu)勢
1.編輯類型多樣化:可進行基因敲除、敲入、點突變或人源化等多種項目類型的基因修飾;
2.QC體系多樣化:細胞階段除了可進行除常規(guī)PCR鑒定外,還可以通過多種手段質檢(QC)ES克隆打靶的準確性,包括染色體核型鑒定、Southern Blot鑒定、qPCR鑒定、FACS鑒定等表達檢測;
3.F0基因型穩(wěn)定:結合賽業(yè)生物專利:TurboKnock顯微注射技術和四倍體補償技術,保障交付的所有F0代小鼠的基因型一致,基因修飾準確、效果穩(wěn)定;
4.品系選擇靈活:賽業(yè)生物可提供C57BL/6NCya、C57BL/6JCya、BALB/cAnCya、129S2/SvPasCya等多品系選擇。