4月17日，腫瘤藥效部研發(fā)科學(xué)家朱金娥為大家主講「乳腺癌動物模型構(gòu)建及應(yīng)用案例」線上課程，以下為本次直播常見問題匯總與解答。

FAQ:
1.McF-7細胞系的免疫缺陷小鼠模型構(gòu)建？
2.如何成功建立原位成瘤小鼠模型？
3.雌激素包埋流程及注意事項？
4.BT-474皮下接種的數(shù)據(jù)參考？
5.頸動脈注射的注射體積和細胞量推薦是多少？

Q：McF-7細胞系的免疫缺陷小鼠模型構(gòu)建？
A：McF-7是ER⁺的乳腺癌細胞，構(gòu)建模型時需要添加雌激素藥片，細胞接種時需要添加基質(zhì)膠，該模型體內(nèi)生長周期一般在7~8周，腫瘤體積達到2000mm³實驗終點。雌激素藥片最好選擇緩釋60天以上的。體內(nèi)接種對于細胞活率和活性狀態(tài)要求較高，細胞活率在90%以上，最好添加基質(zhì)膠。該模型對于宿主依賴性較高，免疫缺陷程度越高，構(gòu)建模型的細胞條件會有所下降。賽業(yè)NKG小鼠是高度免疫缺陷小鼠，McF-7是ER⁺的乳腺癌細胞在NKG上構(gòu)建的模型，可以降低細胞接種量5M/mouse，在裸鼠上構(gòu)建模型推薦用10M/mouse。

Q：如何成功建立原位成瘤小鼠模型？
A：有3點影響因素：
1、細胞活性，構(gòu)建原位一般使用luc過表達的陽性細胞株。細胞培養(yǎng)條件，細胞接種的活率，細胞自身熒光表達能力都會影響原位成瘤；
2、宿主小鼠，原位模型對于小鼠品系依賴較大，根據(jù)實驗需求，是使用免疫缺陷小鼠還是使用免疫重建小鼠亦或者選擇免疫健全小鼠。小鼠品系也是影響原位模型構(gòu)建的一大因素；
3、手術(shù)因素，原位模型（除去乳墊原位接種）一般都需要進行麻醉后接種到原位進行模型構(gòu)建。麻醉和手術(shù)的因素會影響到小鼠存活。

Q：雌激素包埋流程及注意事項？
A：小鼠麻醉，一般雌激素包埋在小鼠的左側(cè)肩胛骨皮下，包埋的入口是在小鼠左側(cè)靠后肢處。皮膚剪開一個可以容納雌激素藥片的口子，用直鑷將雌激素夾緊，遞送到左側(cè)肩胛骨皮下。

Q BT-474皮下接種的數(shù)據(jù)參考？

乳腺癌細胞BT-474乳墊移植腫瘤及體重生長曲線（n=6）

A：將細胞以乳墊注射的形式接種到8周的C-NKG和NOD/scid小鼠體內(nèi)，并在不同的時間點測量成瘤體積。細胞接種前一天，在左側(cè)皮下接種新型雌激素藥片，細胞接種量為5×10⁶/只和1×10⁷/只，數(shù)據(jù)以Mean±SEM形式呈現(xiàn)。結(jié)果顯示BT-474在C-NKG和NOD/scid容易成瘤。腫瘤體積預(yù)計在接種后8天達到100-200mm³,在接種后50天達到1500mm³實驗終點，給藥窗口期預(yù)計在42天左右。

Q：頸動脈注射的注射體積和細胞量推薦是多少？
A：頸動脈注射方法：麻醉小鼠，分離一測頸動脈，縫合線預(yù)備3個結(jié)，先將頸外動脈縫合結(jié)打好，開始注射，注射結(jié)束后，迅速將頸總動脈近心端的結(jié)打死，再打遠心端的縫合結(jié)。一般推薦40ul/mouse。