重組蛋白檢測在各種細胞實驗中的重要作用介紹
為了保證重組蛋白產品的生物活性，MCE 建立了數種基于細胞實驗的測活方法進行檢測，這些方法主要包括：細胞增殖實驗、細胞毒性實驗、細胞粘附實驗、趨化試驗、細胞因子產生實驗、細胞分化實驗等。
細胞增殖實驗，在分子生物實驗中非常重要，它是評價細胞生長、代謝和活力狀況的重要指標。常用的方法包括基于細胞活力檢測的 MTT 檢測法和 CCK8 檢測法等。
許多細胞生長因子 (如 EGF、bFGF 和 VEGF 等增殖因子) 與細胞增殖、分化和存活相關，其作用是通過結合細胞表面的跨膜受體，刺激受體的內在蛋白質 (酪氨酸激酶) 活性，引發下游信號通路級聯反應，使細胞內發生各種生化變化，比如增加細胞核中的轉錄反應等，最終導致細胞增殖。基于這種功能，我們選擇細胞增殖實驗來表征和驗證這類蛋白質的生物活性。
細胞毒性實驗，主要評價細胞損傷、細胞生長、細胞代謝變化的情況，常用的檢測方法也是基于細胞活力的 CCK8 檢測法。炎性因子 TNF-α 作為腫瘤壞死因子超家族的成員，是免疫系統細胞 (活化的單核/巨噬細胞等) 在急性炎癥過程中產生的炎癥細胞因子，可以與細胞表面的幾種不同受體結合 (主要的 TNF-α 受體是 TNFR1 和 TNFR2)，通過介導細胞存活和細胞凋亡信號轉導來參與免疫系統的發育和正常功能[1][2]。
基于 TNF-α 誘導細胞凋亡的功能，我們建立細胞毒性實驗來是很好的檢測方法。用放線菌素 D 處理腫瘤細胞 (如小鼠成纖維細胞株 L-929) 可明顯增強 TNF-α 殺傷腫瘤細胞的活性。
圖 1. Transwell 小室檢測原理圖[3]。
常用分子生物學測定法 (qRT-PCR)，也稱為報告基因法，通過檢測細胞內細胞因子的基因或 mRNA 的量，推算出細胞因子的產生量。
堿性磷酸酶 (alkaline phosphatase, ALP) 在大多數細胞類型中均有表達，但其在具有更新、分化潛能的細胞中呈高水平表達。通過 ALP 活性測定來評估生長分化因子、骨形態發生蛋白等對細胞分化和增殖的影響。
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參考文獻：
[1] Locksley R M, Killeen N, et al. “The TNF and TNF receptor superfamilies: integrating mammalian biology.” Cell, 2001, 104(4): 487-501.
[2] Ciebiera M, Włodarczyk M, et al. “The Role of Tumor Necrosis Factor α in the Biology of Uterine Fibroids and the Related Symptoms.” Int J Mol Sci. 2018 Dec 4;19(12):3869.
[3] Justus, C.R., Marie, M.A., et al. “Transwell In Vitro Cell Migration and Invasion Assays.“ Cell Viability Assays. Methods in Molecular Biology, 2023, vol 2644. Humana, New York, NY.
