流式分析儀因其可對單顆粒樣品進行高通量多參數分析，已廣泛應用于當前備受關注的小顆粒樣品分析工作中。當前市場流式細胞儀品類繁多，那么又該如何選擇更加適合自己研究項目，特別是適合臨床級實驗高可靠性要求的流式分析方案呢？

近日來自丹麥奧爾堡大學臨床醫學系和其醫院臨床生化系的Jaco Botha等研究人員，使用包括英國Apogee Flow公司超靈敏高分辨率納米流式分析儀A60 Micro-PLUS在內三種不同的流式分析儀系統進行外泌體微囊泡（EVs）可靠性比較分析，包括大小分析定量，熒光標記分析，濃度測定重復性及大量樣品重復檢測穩定性等[1]，為不同應用場景和不同分析需求，選擇最佳分析方案提供了堅實的參考信息。

Apogee超靈敏納米流式分析儀，專為小顆粒分析優化設計，在EVs等小顆粒分析應用工作中，參與發表數百篇文章，充分體現其靈敏度，穩定性和可靠性等性能出眾，備受認可。

Jaco Botha等人的研究成果，大量直接對比數據再次體現出Apogee超靈敏納米流式分析儀：

》》分析<300nm Silica標準微球（相對Polystyrene材質，Silica材質折射率更加接近EVs樣品折射率）, 散射光性能更加出眾可靠（圖1）：可檢測出更小的顆粒，更準確的濃度

》》分析不同大小不同材質納米級標準微球，計數穩定性表現更為突出（圖2）：更低的CV數值

》》分析熒光標記EVs樣品，同一天/不同天不同批次樣品之間，大量樣品不同批次總體分析之間，系統分析穩定性同樣更為可靠（圖3）：更低的變異系數

圖1，不同流式分析技術散射光分析不同大小，不同材質標準微球可靠性比較

圖2，不同流式分析技術分析不同大小Silica標準微球計數穩定性性比較
 

圖3，不同流式分析技術分析不同大小Silica標準微球計數穩定性性比較

部分節選內容參考如下：

 “In line with observations for LoD and LoQ, Apogee A60 Micro-PLUS tended to be more sensitive in detecting small silica nanospheres, scattering very small amounts of light than all other platforms, followed by ImageStream X Mk II and, lastly, FACS Aria III. For larger silica nanospheres, all platforms performed similarly. Finally, results for fluorescent polystyrene nanospheres reflected those for silica nanospheres, where Apogee A60 Micro-PLUS performed better than other platforms in detecting small nanospheres”

  “In summary, the Apogee A60 Micro-PLUS demonstrated the overall lowest variabilities in EV concentration determinations, and global and inter-day variabilities did not differ much from intra-day variabilities. The FACS Aria III performed similarly and ex- hibited somewhat increased variabilities in EV concentration determinations compared to the Apogee A60 Micro-PLUS. Finally, although the average concentrations of EV phe- notypes did not differ between analysis days on the ImageStream X Mk II, it presented with the highest intra-day and global variabilities in EV concentrations across EV samples and phenotypes”

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參考資料

1. Botha J, Pugsley H R, Handberg A. Conventional, High-Resolution and Imaging Flow Cytometry: Benchmarking Performance in Characterisation of Extracellular Vesicles[J]. Biomedicines, 2021, 9(2): 124.

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