細胞計數(shù)儀與活細胞成像儀助力病毒轉染實驗效率翻倍
病毒是一類非細胞性病原體，其結構很簡單，主要結構包括核酸和結構蛋白，部分病毒還存在一些脂質(zhì)包膜，就像HIV和流感病毒。HIV（人類免疫缺陷病毒1型）是一種包膜型逆轉錄病毒，其病毒粒子由包膜（envelope）、衣殼（capsid）和病毒核心（viral core）構成，各組分通過精密組裝實現(xiàn)宿主細胞感染及復制功能。
除了我們常見的HIV之外，我們?nèi)粘Ｖ谐Ｒ姷牟《酒鋵嵾�有很多種，包括慢病毒，腺病毒，腺相關病毒和逆轉錄病毒。其中慢病毒常被用于細胞轉染來獲得過表達基因產(chǎn)物；腺病毒常被用于疫苗開發(fā)，腫瘤治療和瞬時基因表達研究；腺相關病毒會被用在遺傳病治療，例如脊髓性肌萎縮癥，包括神經(jīng)科學的研究以及眼科疾病的研究；逆轉錄病毒，因為僅感染分裂期的細胞，因此它的核心應用一般都是在造血系統(tǒng)的改造和體外基因編輯上，也因為它具有穩(wěn)定的整合能力，并且能夠快速獲得擴增的細胞，因此通常會被用在基因編輯中。
病毒作用機制
以慢病毒載體為例，慢病毒與宿主細胞表面的受體結合后，它會通過受體結合的方式來進入細胞，同時將外源基因釋放到細胞質(zhì)中，由于細胞核是多孔的結構，所以病毒的遺傳物質(zhì)很容易入核，并在細胞核中表達。
病毒轉染過程中可能存在的問題以及解決方案
在病毒轉染過程中往往存在一些難以把控的因素，如病毒的拷貝數(shù)、細胞處于分裂期的具體情況、后期轉染效率的監(jiān)測、安全性問題等。在這些過程中，我們需要做好標準化的處理和應對。
①轉染前準備： 嚴格控制起始轉染細胞梳理。選擇細胞計數(shù)儀精準測定細胞密度，確保轉染時細胞處于最佳生長狀態(tài)（如70-80%匯合度），避免因細胞量偏差導致轉染失��！
②實時監(jiān)控、數(shù)據(jù)可靠：活細胞成像儀全程無創(chuàng)追蹤轉染后細胞動態(tài)：從病毒吸附到基因表達，熒光標記一目了然！還能分析細胞存活率，告別“盲測”時代。支持長時間動態(tài)追蹤，減少人工取樣誤差，提供有效數(shù)據(jù)。
③轉染效率快速檢測：前期確認合適轉染條件后，考慮外來基因整合到宿主細胞長期傳代可能導致目的基因丟失，可借助細胞分析儀對細胞熒光表達進行鑒定。通過細胞分析儀能夠非常直觀地判斷出長期傳代后的基因表達水平，并及時對丟失掉目的基因的細胞進行再次轉染，穩(wěn)定基因表達強度。
病毒轉染專屬實驗流程
①選擇合適的細胞培養(yǎng)板并接種適量的細胞
②基于實驗需求，設置實驗組和對照組
③質(zhì)粒轉染
④細胞樣本置于培養(yǎng)箱中活細胞成像儀上穩(wěn)定培養(yǎng)觀察記錄
⑤轉染結果分析，使用JuLI Stage活細胞成像儀延時成像監(jiān)測，自動生成視頻，基于圖像進行轉染效率定量
JuLI Stage 活細胞成像儀助力轉染實驗文獻案例
維也納醫(yī)科大學癌癥研究中心實驗組于Drug Resistance Updates ( IF 15.8 ) 發(fā)表文獻，其中HEK293 細胞中轉染 pRetroX-G1-mCherry-puro，向細胞中加入多柔比星 （DOX）、 順鉑 （CIS） 或奧拉帕尼 （OLA）處理120 小時，使用JuLI Stage活細胞成像儀每半小時拍攝一次，監(jiān)測轉基因表達。通過結果可以實時對比觀察在不同處理下轉染效率的差異，與對照組相比，細胞處理后在 G1 期逐漸積累，導致生長停滯。
高效轉染，工具先行！病毒轉染實驗的挑戰(zhàn)在于細節(jié)的把控。精準的細胞計數(shù)是成功的前提，實時的活細胞成像則是洞察過程、驗證結果的利器。細胞計數(shù)儀與活細胞成像儀的強強聯(lián)合，通過提供起始點的精確性和全過程的透明化，真正實現(xiàn)了實驗效率的“翻倍”。告別模糊與猜測，擁抱精準與高效——讓這兩款必備工具成為您病毒轉染實驗流程中的標準配置，顯著提升您的研究產(chǎn)出與成功率。
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