DNA甲基化研究的三大前期探索性實(shí)驗思路介紹
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近些年以來，DNA甲基化研究一直是頂級期刊、基金資助、臨床研究、藥物研發(fā)上市的多重?zé)狳c(diǎn)，其研究方向涵蓋疾病發(fā)生發(fā)展、疾病標(biāo)志物研究、環(huán)境因素暴露與響應(yīng)、發(fā)育和分化等多維度。
研究人員為DNA甲基化課題申請作準(zhǔn)備以及為降低DNA甲基化實(shí)驗風(fēng)險，通常會進(jìn)行DNA甲基化研究的前期探索性實(shí)驗，主要包括：
一、檢測DNA甲基化酶和去甲基化酶的表達(dá)
方法包括：
e.g. 高脂飲食組和肥胖人群中均觀察到DNMT的RNA和蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)
二、檢測整體DNA甲基化水平變化
方法包括：
² 5mC甲基化免疫熒光染色（定性）
² DNA斑點(diǎn)雜交（定性）
² 比色法（定量）
² 質(zhì)譜法（定量）
三、其他前期實(shí)驗
在沒有條件開展甲基化相關(guān)前期實(shí)驗的情況下，也可以開展其他預(yù)實(shí)驗。包括：
² 關(guān)鍵表型指標(biāo)測定
² 轉(zhuǎn)錄組（成本低廉）
在進(jìn)行前期探索性實(shí)驗后，DNA甲基化的研究思路與項目設(shè)計還包括：技術(shù)選擇、數(shù)據(jù)挖掘、下游驗證。
近些年以來，DNA甲基化研究一直是頂級期刊、基金資助、臨床研究、藥物研發(fā)上市的多重?zé)狳c(diǎn)，其研究方向涵蓋疾病發(fā)生發(fā)展、疾病標(biāo)志物研究、環(huán)境因素暴露與響應(yīng)、發(fā)育和分化等多維度。
研究人員為DNA甲基化課題申請作準(zhǔn)備以及為降低DNA甲基化實(shí)驗風(fēng)險，通常會進(jìn)行DNA甲基化研究的前期探索性實(shí)驗，主要包括：
- 檢測DNA甲基化酶和去甲基化酶的表達(dá)
- 檢測整體DNA甲基化水平變化
- 其他前期實(shí)驗
一、檢測DNA甲基化酶和去甲基化酶的表達(dá)
方法包括：
- RT-qPCR檢測mRNA表達(dá)
- Western blot檢測蛋白質(zhì)翻譯
e.g. 高脂飲食組和肥胖人群中均觀察到DNMT的RNA和蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)
二、檢測整體DNA甲基化水平變化
方法包括：
² 5mC甲基化免疫熒光染色（定性）
² DNA斑點(diǎn)雜交（定性）
² 比色法（定量）
² 質(zhì)譜法（定量）
斑點(diǎn)雜交（Dot blot）
免疫熒光顯微觀察
比色法/質(zhì)譜法
三、其他前期實(shí)驗
在沒有條件開展甲基化相關(guān)前期實(shí)驗的情況下，也可以開展其他預(yù)實(shí)驗。包括：
² 關(guān)鍵表型指標(biāo)測定
² 轉(zhuǎn)錄組（成本低廉）
在進(jìn)行前期探索性實(shí)驗后，DNA甲基化的研究思路與項目設(shè)計還包括：技術(shù)選擇、數(shù)據(jù)挖掘、下游驗證。
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