類器官培養基的種類、主要成分和配置、選型方法
作為生命科學研究最常用且最重要的方法，細胞體外培養技術直接影響了研究結果的準確性。傳統二維細胞培養模型，藥物無差別作用于每個細胞，細胞間作用力弱，類型單一，細胞貼壁生長，無法模擬體內的生長環境和空間結構。類器官培養不僅能高度模擬體內細胞生長環境，保持細胞生長結構，擁有器官的部分功能特性，而且能更好地代表組織器官的生理功能和生物學特性。但現階段許多類器官原代建立尚存在成功率低，培養條件不穩定的情況，而使用合適、優秀的類器官培養基不僅是類器官培養成功的一大關鍵，還能省時省力節約科研成本。
今天我們來聊聊類器官的培養基。
類器官培養基的主要成分
類器官培養基主要由基礎培養基、培養基補充劑、氨基酸、細胞因子、小分子抑制劑、激素、緩沖液等構成[1]。
常用的基礎培養基有Advanced DMEM/F12,Advanced DMEM等。這個根據不同類器官需求不難選擇。但細胞因子、小分子抑制劑、激素這些量小作用大的就讓人頭疼了，常見的有30余種不同成分。如廣泛使用的Wnt-3a，常用于乳腺類器官、小腸類器官、肝臟類器官的R-spondin-1，表皮生長因子[2]，Noggin，激活素；以及促進增殖、防止分化、維持干性的A83-01等等。
一、材料與知識準備
1.研究文獻
一般需要1周左右時間的文獻查閱來確定培養基成分并估算用量。
2.購買培養基配置材料
對于細胞因子、抑制劑、激素等小批量購買時不僅需要極高的單價還要極長的貨期。正常到貨需1到2個月，等待期間可進行該類器官培養操作的技術學習。
二、類器官培養基配置方法
1.實驗儀器及材料
（1）儀器：生物安全柜、電子分析天平、pH計、超純水器等；
（2）材料：燒杯、容量瓶、分裝瓶等；用于培養基配制的器皿需做到：不掛水滴、無有機物、無致熱原[3]。
2.培養基配置
（1）配制用水：選擇最新過濾的反滲透水，再用超純水機過濾為去熱原培養基用水（TOC<10，即總有機碳<10mg/L）；
（2）使用電子天平準確稱量試劑，充分溶解，并調節pH值至7.4，定容后過濾分裝；
（3）按不同類器官對因子的需求向基礎培養基中加入所需細胞因子和抑制劑如Wnt-3a[4]、R-spondin-1、Noggin等，充分混勻。
三、自配培養基完成后的常見問題
培養基配制完成后，材料齊備便可進行類器官的培養，而新手培養類器官若沒有正確的技術指導以及方便快速的步驟流程，僅憑借看文獻得來的技術培養常常事倍功半難以成功。此時若類器官長勢差、出芽率低、活性差，難以判斷是技術原因還是培養基原因，更有甚者形態怪異，與所知該類器官應有形態不一致，在類器官鑒定后發現所培養的類器官并非目標類器官，只能通過反復分析，重新配制，再次培養，既耗時又費力。
研究實驗常常無法確定培養基中的因子用量，配制培養基時條件嚴苛，步驟也繁多，配制時需小心謹慎，且費時費力。因此從文獻研究開始，到培養的類器官可以進行實驗需要6個月甚至更久。
正所謂術業有專攻，對因子方面研究不多的老師即使沒有錯漏的配制出來后，也同樣容易出現培養的類器官出芽率低，活性差，或是類器官長勢良好卻在研究中掉鏈子的情況，甚至研究開始后進展不佳難以繼續。
那么有沒有什么方法能打破由培養基配制問題造成的時間浪費、成本支出過高、培養效果不佳等研究阻礙呢？
購買模基類器官培養基進行科學研究
一、產品選擇和方案推薦
在購買�；a品時，通常銷售人員會問清各位學者老師所研究的實驗方向，培養的類器官種類，并根據用戶個性化的需求對用戶進行最佳產品、貨號的推薦，以便用戶獲得性價比最高、效果最優的產品。
二、技術支持
模基生物發貨快，貨期短。一般1~2周便可到手進行類器官培養，在貨期等待期間模基生物會將該方面培養方法，培養操作流程等一并送出，并在類器官交流群中為大家實時答疑。
三、類器官培養
模基生物類器官培養經驗豐富，總結的培養實驗流程操作簡單而又效果極佳。根據模基實驗方案可大幅提升初次培養成功率，在材料上和技術上都為用戶盡可能提高了培養的成功率，而若不幸培養失敗，模基也能協助分析原因。為用戶節省時間，減少材料消耗，從產品細節詢問至類器官能進行研究實驗僅需1～1.5個月。
四、總結
綜上，若研究本身便以因子，小分子抑制劑為重點，那么自己配制類器官培養基是必要的。而對于不以優化培養基成分為目的的研究實驗，比起自配類器官培養基來說選擇�；囵B基則是類器官方面研究的一大助力。
價格方面，自配培養基最大的支出在于細胞因子，細胞因子通常購買量少則單價大幅提升。以常用因子rhR-spondin-1為例，1mg標準的rhR-spondin-1需2萬元左右，而5×20μg標準的rhR-spondin-1便需要1萬多元。不考慮多買以備不足的因子僅以消耗計算，自配500ml類器官培養基需近兩萬元，�；惼鞴倥囵B基500ml則在一萬元左右。
時間方面，自配培養基的老師在材料還未到手時，選擇模基培養基的老師便已完成類器官培養開始研究了。
技術方面，模基生物有扎實的類器官理論基礎，豐富的類器官培養經驗，以及堅定的科研信念。在這樣的技術支持下培養的類器官雖不能令各位老師的研究實驗一片坦途，毫無困難；但能穩定發揮，排除干擾讓各位老師不為類器官培養所掣肘，在所擅長的研究領域一展身手，大顯神威。
五、參考文獻
[1]劉琦,姚茜,韋正波,謝瑩.類器官培養基主要成分的作用機制及潛在功能【J】.中國組織工程研究,2021(31):5072-5078.
[2]米杜秋,張路陽,劉強,張東勇.表皮生長因子對膠質瘤干細胞增殖與侵襲的影響【J】.解剖科學進展,2019(01):70-73.
[3]張宏 , 劉玉琴 . 培養基的正確制備及使用 [J]. 基礎醫學與臨床 ,2009, 29(4):446-448.
[4]XIAO XH, HUANG QY, QIAN XL, et al. Cdc42 Promotes ADSC-Derived IPC Induction, Proliferation,And Insulin Secretion Via Wnt/β-Catenin Signaling. Diabetes Metab Syndr Obes. 2019;12:2325-2339.
