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原代細胞培養中的六個錯誤做法【賽百慷原創】

瀏覽次數:2831 發布日期:2017-7-3  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

原代細胞培養與細胞株不同,兩者在培養過程中的操作方法也不一樣。這里對原代細胞操作過程中容易出現的6個錯誤及對應方法做一個說明。

1.長時間水浴解凍

因為原代細胞非常容易受到解凍過程的影響,所以在37℃水浴鍋中解凍時,要在水中擺動溶解。在細胞半溶后(不要等到全部溶解),迅速拿到生物安全柜或超凈臺中,用1ml的槍,抽出事先準備好的完全培養基打入凍存管中,然后抽到培養瓶中,反復進行,直至完全溶解

        

2.把凍存管的細胞溶解后迅速離心
如果原代細胞溶解后馬上離心,細胞所受的打擊可能比DMSO的毒性還要大,不建議采用這個方法。用帶有血清的完全培養基溶解后鋪瓶,第二天換液去除DMSO。

3.讓原代細胞長滿(100%)瓶(皿、板)
原代細胞長滿后,細胞會出現老化。因為原代細胞不是100%的細胞團,把混入的細胞控制在最小限度非常重要。建議細胞長到90-95%進行傳代

4.傳代時用大量的胰蛋白酶處理
原代細胞傳代時,要用低濃度的胰蛋白酶消化,在顯微鏡下看到細胞開始變圓、脫落后迅速終止胰蛋白酶。建議采用含10%血清的完全培養基終止或大豆由來的蛋白酶終止劑終止。

5.細胞培養后再凍存
原代細胞再凍存后,細胞會老化、也可能引起機能變化,所以不建議再凍存。細胞再凍存也是細胞死傷的主要原因。

6.原代細胞無限增殖

原代細胞和細胞系不同,增殖能力是有限的。為了防止遺傳上的變化,最好盡快開始做實驗。另外,為了防止混入雜細胞比例的增加,要經常觀察細胞形態。

發布者:鏡像綺點(上海)細胞技術有限公司
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