直接從離體組織中獲取細胞，往往更加接近于生物體內(nèi)的真實狀態(tài)。因而，這類細胞在藥物篩選、細胞移植、類器官培養(yǎng)以及腫瘤研究方面均得到了較為廣泛的應用。然而，生物體組織一般需消化成單個細胞才可以進行體外培養(yǎng)。在進行細胞組織消化時，種類繁多的消化酶類往往使人眼花繚亂。選擇不合適的酶進行組織消化，可能會引起消化不完全、細胞死亡率高等問題。如何選擇合適的酶進行組織消化，困擾著不少科研工作者。為此，本文介紹了用于組織消化的常見酶類以及適用的組織，包含了正常組織以及腫瘤組織的消化方案。
 

1. 胰蛋白酶

胰蛋白酶（TrypLUS消化液）是一種利用微生物生產(chǎn)的動物胰蛋白酶替代物，是一種無動物來源的重組酶，可用于解離一系列的貼壁哺乳動物細胞，穩(wěn)定性更高，純度更好，消化更溫和，細胞毒性更低。目前主要應用于細胞培養(yǎng)中，可以在賴氨酸和精氨酸的C末端切割肽鍵，可以替代豬或牛胰蛋白酶（Trypsin）對貼壁細胞的消化解離。

2.胰蛋白酶

胰蛋白酶(Trypsin)其主要作用于賴氨酸或精氨酸結合的肽腱，除去細胞間粘蛋白及糖蛋白，影響細胞骨架，從而分離細胞。胰蛋白酶適用于消化細胞間質(zhì)較少的軟組織，如胚胎、上皮、肝、腎等組織。但對于纖維組織和較硬的癌組織的效果較差，常常將胰蛋白酶與其他消化酶聯(lián)合使用。EDTA可以用來增強胰蛋白酶的水解功能，而血清則會影響胰蛋白酶的活性。

3.膠原酶

膠原酶(Collagenase)主要通過水解細胞間質(zhì)的脯氨酸，分離細胞。膠原酶對膠原的消化作用很強，僅對細胞間質(zhì)有消化作用，對細胞的損害小，因此適用于消化分離纖維性組織和較硬的癌組織。鈣鎂離子和血清不會對膠原酶的活性及消化作用產(chǎn)生影響。膠原酶可細分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型膠原酶，不同類型膠原酶適用范圍不同，具體見表1。其中，膠原酶 Ⅰ 適用于大多數(shù)組織；膠原酶 II 消化能力稍強，通常用于骨、軟骨以及較硬/致密的腫瘤等致密組織；膠原酶 IV相比于膠原酶 Ⅰ 消化作用稍微溫和一些。
 

表 1. 膠原酶類型及適用范圍表

4. 透明質(zhì)酸酶

透明質(zhì)酸酶(Hyaluronidase)主要通過隨機降解透明質(zhì)酸的β-N-乙酰己糖胺-[1-4]糖苷鍵，從而降低透明質(zhì)酸的活性，常與膠原酶等聯(lián)合使用，用于結締組織的分離。

5. 脫氧核糖核酸酶Ⅰ

脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DeoxyribonucleaseⅠ, DNaseⅠ)可作用于細胞分離降解出的DNA，避免DNA引發(fā)的細胞凝集，對細胞完整性無破壞作用。通常配合膠原酶或透明質(zhì)酸酶等聯(lián)合使用，一般不會單獨使用。

6. 中性蛋白酶

中性蛋白酶(Dispase)具有溫和的蛋白酶水解活性，不會損壞細胞膜的完整性，常與膠原酶等聯(lián)合使用，其分離纖維樣組織的效率高于上皮組織。

7. 彈性蛋白酶

彈性蛋白酶(Elastase)通過作用于彈性蛋白的肽鍵、酰胺鍵和酯鍵將其水解，常與胰蛋白酶和膠原酶等聯(lián)合使用，用于分離結締組織和含有大量細胞網(wǎng)狀纖維的組織。

8. 組織消化參考方案

不同組織消化方案有所不同，同種組織的消化方案也不盡相同，考慮到組織的特殊性及酶的多樣性，針對具體組織仍需試驗摸索以確定最佳消化方案。以下組織消化方案僅供參考。

表 2. 正常組織消化用酶列表

表 3. 腫瘤組織消化用酶列表
 

逐典TrypLUS消化液優(yōu)勢

1. DMF備案

2. 非動物來源

3. 室溫貯存，無需胰酶抑制劑，稀釋即可終止

4. 消化溫和，消化后細胞活性高

5. 即開即用，方便快捷

逐典TrypLUS消化液應用案例