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浙大醫學院腦科學及腦醫學院以優化的“Apogee納米流式測試”以檢測星形膠質細胞外泌體為帕金森病病變和診斷作研究

浙大醫學院腦科學及腦醫學院以優化的“Apogee納米流式測試”以檢測星形膠質細胞外泌體為帕金森病病變和診斷作研究

α-突觸核蛋白（α-syn）的積累是帕金森病 (Parkinson’s Disease, 簡稱PD) 發育和進展的重要步驟，不僅在神經元中觀察到，而且在神經膠質細胞（包括星形膠質細胞）中也觀察到。調節星形膠質細胞α-syn水平和聚集的機制尚不清楚。最近，科研人員已經證明α-syn的一部分擴散是通過細胞外囊泡（EV）發生，盡管目前尚不清楚在PD病變中星形膠質細胞是否參與這過程。然而，眾所周知，源自中樞神經系統的EV存在于血液中，并被廣泛探索為PD和其他神經退行性疾病的生物標志物。 

在這文章中, 浙大醫學院腦科學及腦醫學院利用了Apogee納米流式儀去檢測PD病人， 多系統萎縮癥 （Multiple System Atrophy， 簡稱MSA）病人和健康對照組(Healthy Control, 簡稱HC)的血清樣本中的星形膠質細胞衍生的EVs（AEV）水平，以研究AEVs作為診斷PD的生物標志物。研究人員把這優化好的檢測方法稱為“Apogee assays”。

首先，研究人員先證明“Apogee Assays”針對檢測血清中的AEV的特異性和穩定性。在這次檢測中， 研究人員利用GLT-1 (glutamate transporter 1)，總α-syn （SYN211)和聚集體α-syn (MJFR14)作為檢測AEV的標志物。GLT-1標志物會以Alexa Fluor 405熒光標志，從結果中可以看見GLT-1+的EVs可清楚于血清中檢測出來，而IgG對照組只有很少量可檢測出來(Fig.1a, d)。而SYN211和MJFR14則以Alex Fluor 488標志，檢測結果也顯示可在血清中可以明顯地檢測出來，而且比IgG對照組高出很多 (Fig. 1b, c, e, f)。同時，結果也證明GLT-1+，SYN211+和MJFR14+在EV耗盡的血清中的水平明顯地降低了很多 (Fig. 1a-f)，這證明了“Apogee Assays”方法的特異性。最后，研究人員把GLT1，SYN211和MJFR14三個標志物的抗體進行不同濃度的稀釋 (Fig. 1g-i)和孵育時間的改變進行測試，說明“Apogee Assays”的方法也有很好的穩定性 (Fig. 1j-l)。

Fig. 1

研究人員利用“Apogee Assays”并對106個PD病人樣本，47 MSA病人樣本和103個HC樣本進行檢測。從臨床樣本檢測的結果中，GLT-1+、SYN211+、和MJFR14+在PD病人樣本中的水平都比HC和MSA的樣本為高。針對樣本中帶有總α-syn的AEV (GLT-1+/SYN211+)的水平，PD樣本明顯地比MSA樣本和HC樣本為高。而帶有聚集體α-syn的AEV (GLT-1+/MJFR14+)的水平，在PD和MSA樣本中也是明顯地比HC為高 (Fig. 2)。

Fig.2

文章在最后的總結中，指出利用“Apogee Assays”去檢測血清中的帶有α-syn的AEV水平，可以作為診斷PD的一個有用的生物標志檢測方法。

英國Apogee超靈敏納米流式分析儀，專為外泌體微囊泡（EVs）等小顆粒分析優化設計，在EVs樣品顆粒大小分析，絕對定量，多標記物同時快速分析工作中廣泛應用。截止目前，該設備已累計參與數百篇高質量同行審議文章相關實驗分析工作。其出色的靈敏度，穩定性及可靠性已備受業內廣泛認可，并將繼續為EVs相關基礎研究及轉化應用提供堅實支持。

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