注    意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
GCS（EC 2.4.1.11）催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP，以α-1，4-糖苷鍵相連延長(zhǎng)糖鏈，是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶，是胰島素作用的主要靶酶，對(duì)糖代謝的調(diào)節(jié)和血糖穩(wěn)態(tài)的維持具有重要作用。
 
測(cè)定原理：
GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UDP，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADH氧化生成NAD⁺，在340nm下測(cè)定NADH下降速率，即可反映GCS活性。
 
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
 
試劑的組成和配制：
提取液：60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體45 mL×1瓶， 4℃保存； 
試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體41μL×1支，4℃保存；
試劑四：粉劑×1支， -20℃保存；
試劑五：粉劑×1瓶， -20℃保存；
 
樣本的前處理： 
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
 
測(cè)定步驟：

• 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
• 工作液的配制：臨用前將試劑三和試劑四轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
• 試劑五的配制：臨用前在試劑五瓶中加入2.5mL試劑二充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
• 將工作液和試劑五置于37℃預(yù)熱5分鐘。
• 在1mL石英比色皿中加入50μL樣本、50μL試劑五和900μL工作液，立即混勻，記錄340nm處初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A1-A2。

 
注意：在該試劑盒中，若ΔA大于0.1，需將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定，使ΔA小于0.1可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
 
GCS活性計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCS（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V樣×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCS（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=3215×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，1×10^-3 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。