銳賽小課堂1217-156

FCM數(shù)據(jù)的存貯的方式是FCS2.0（flow cytometry standard），采用列表排隊(duì)(List Mode)方式。易于加工處理分析，但缺乏直觀性，數(shù)據(jù)的顯示通常有一維直方圖、二維點(diǎn)圖、等高線圖、密度圖等幾種；由數(shù)據(jù)還可以做出標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量分析。
 

Q1：坐標(biāo)軸的意義？

1、  單參數(shù)直方圖

每一個(gè)細(xì)胞單參數(shù)的測(cè)量數(shù)據(jù)可以整理成統(tǒng)計(jì)分布，以直方圖的方式來(lái)顯示。在圖中，橫坐標(biāo)表示熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度的值，其單位是道數(shù)（channel），可以是線形（line）或者對(duì)數(shù)（log）。縱坐標(biāo)一般是相對(duì)細(xì)胞/粒子數(shù)（count）！
 

2、二維圖

在二維圖的中，橫坐標(biāo)/縱坐標(biāo)都表示熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度的值，可以是線形（line）或者對(duì)數(shù)（log）。雙參數(shù)圖可以將樣品細(xì)胞群分開(kāi)，從而方便對(duì)感興趣的細(xì)胞進(jìn)行分析。

Q2：“Gate”和 “Regin”？

設(shè)門(mén)是流式細(xì)胞分析中一種重要的技術(shù)，只有通過(guò)最佳的設(shè)門(mén)方式，才能準(zhǔn)確地獲取和分析數(shù)據(jù)，從而得到臨床診斷和科研中有價(jià)值的信息。

On-line gating(threshold gating)監(jiān)測(cè)/獲取數(shù)據(jù)
Off-line gating： 分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)          散射光設(shè)門(mén)/熒光設(shè)門(mén)          散射光/熒光聯(lián)合設(shè)門(mén)         

多重邏輯門(mén)(組合門(mén))多重邏輯門(mén) G3=R1 and R2 (G3=R1×R2)

其它： G=R1 or R2 G=R1 not R2Q3:流式圖中的顏色與熒光顏色?
 

流式圖中的顏色為區(qū)分不同細(xì)胞群而人為指定, 與熒光顏色無(wú)關(guān)!!

Q4：流式圖中的陰/陽(yáng)（N/P）如何劃分?

如何做M1陰性界限？實(shí)際上，這個(gè)M1的劃分完全是根據(jù)陰性(同型)對(duì)照來(lái)的！如下圖：左圖為同型對(duì)照，即：您所檢測(cè)的物質(zhì)在陰性組中的基礎(chǔ)表達(dá)量，可以理解為背景、靜息狀態(tài)下、基礎(chǔ)水平、未受刺激時(shí)等。右圖即陽(yáng)性組，也就是接受刺激后，功能狀態(tài)下、藥物作用后等。

Q5:  這么巧，陰性正好在101劃分？？

其實(shí), 我們可以人為地將電壓，放大倍數(shù)調(diào)到相應(yīng)的大小，使陰性的右邊界在某一個(gè)值上，（通常劃在101附近）這樣后期做sample時(shí)好看！當(dāng)然也可以調(diào)到102，103次方。

Q6：為什么要進(jìn)行熒光補(bǔ)償？

流式細(xì)胞分析中經(jīng)常要用到2種以上的熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行染色，而目前所使用的多種熒光染料發(fā)射譜間有一定重疊。

“熒光補(bǔ)償”這個(gè)術(shù)語(yǔ)是指修正熒光滲漏的過(guò)程，如從探測(cè)器除去除匹配熒光以外的任何熒光信號(hào)。

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