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報告基因檢測概述

瀏覽次數(shù):2674 發(fā)布日期:2014-9-8  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
報告基因檢測是功能基因組學研究的一個重要手段,在真核基因表達調控研究和相關藥物或蛋白篩選工作中,有廣泛的應用。報告基因檢測系統(tǒng),是把順式調控元件(即DNA非編碼序列)與某一種非常容易被鑒定的蛋白(即報告基因產物)的編碼序列連接起來,通過測定該報告基因在細胞內的表達產物的量或活性,來判斷順式調控元件的表達調控作用。這種間接的測定技術,提供了一種簡單、有效、有時是唯一可行的檢測體系。報告基因檢測技術,涉及報告基因載體質粒構建、細胞轉染、報告基因產物測定等方法。
 
理想的報告基因通常應具備以下特點:已被克隆和全序列已測定;表達產物在受體細胞中不存在(即無背景);細胞內其它的基因產物不會干擾報告基因產物的檢測;基因產物在細胞內的含量能夠實時反映該基因的轉錄活性狀態(tài);報告基因編碼產物的檢測方法應該快速、簡便、靈敏度高而且重現(xiàn)性好。
 
目前實驗室較為常用的報告基因有以下幾種:熒光素酶(luc)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、氯霉素乙酰轉移酶(CAT)、β-葡萄糖苷酸酶(GUS)、分泌型堿性磷酸酶(SEAP)、綠色熒光蛋白(GFP)以及生長激素(hGH)等。其中熒光素酶報告基因具有檢測速度快、靈敏度高、費用低等優(yōu)點,得到了最為廣泛的采用。在報告基因檢測體系中,報告基因的活性與特異性刺激互相影響。因此除了主報告基因質粒外,通常還需包含另一種報告基因質粒,共轉染同一細胞,以作為轉染效率和細胞數(shù)量、狀態(tài)的內參照,使主報告基因的結果歸一化。
發(fā)布者:北京康潤誠業(yè)生物科技有限公司
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