本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中甲狀腺素(T4)含量。

 

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠甲狀腺素(T4)水平。用純化的小鼠甲狀腺素(T4)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入甲狀腺素(T4)，再與HRP標記的甲狀腺素(T4)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甲狀腺素(T4)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠甲狀腺素(T4)濃度。

 

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融；

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

 

標準品的稀釋：

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻；

溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘；

配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用；

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干；

加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外；

溫育：操作同3；

洗滌：操作同5；

顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘；

終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）；

測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。