犬新孢子蟲（Neospora caninum）是一種專性細胞內寄生的原蟲，主要感染犬科動物及多種哺乳動物，可導致流產、神經系統疾病等。其相關蛋白在致病機制、診斷及疫苗研發中具有重要作用，以下從蛋白結構、分子量等參數展開介紹：

1. 表面抗原蛋白（Surface Antigens, SAGs）

   • 代表性蛋白：NcSAG1、NcSAG2、NcSAG3 等。
   • 蛋白結構： 
     • 屬于跨膜糖蛋白，含有保守的半胱氨酸結構域和可變區，通過糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨定在蟲體表面。
     • 結構中包含 α- 螺旋和 β- 折疊，形成抗原表位，參與蟲體與宿主細胞的黏附及免疫逃逸。
   • 分子量： 
     • NcSAG1：約 30-35 kDa（不同株系略有差異）；
     • NcSAG2：約 25-28 kDa；
     • NcSAG3：約 23-25 kDa。
   • 功能：介導蟲體與宿主細胞膜的結合，誘導宿主產生免疫反應，是診斷和疫苗開發的重要靶點。

2. 棒狀體蛋白（Rhoptry Proteins, ROPs）

   • 代表性蛋白：NcROP2、NcROP16 等。
   • 蛋白結構： 
     • 分泌型蛋白，含信號肽序列，結構中存在卷曲螺旋結構域，部分蛋白具有激酶活性（如 NcROP16）。
   • 分子量： 
     • NcROP2：約 40-45 kDa；
     • NcROP16：約 60-65 kDa。
   • 功能：在蟲體入侵宿主細胞時釋放，參與形成納蟲泡（PV），調控宿主細胞信號通路，抑制宿主免疫應答。

3. 微線體蛋白（Microneme Proteins, MICs）

   • 代表性蛋白：NcMIC2、NcMIC6 等。
   • 蛋白結構： 
     • 含分泌型信號肽、黏附結構域（如表皮生長因子樣結構域）和跨膜區，部分蛋白通過 GPI 錨定。
   • 分子量： 
     • NcMIC2：約 60-65 kDa；
     • NcMIC6：約 35-40 kDa。
   • 功能：在蟲體入侵初期與宿主細胞受體結合，促進蟲體黏附和侵入，是入侵機制的關鍵蛋白。

4. 致密顆粒蛋白（Dense Granule Proteins, GRA s）

   • 代表性蛋白：NcGRA1、NcGRA7 等。
   • 蛋白結構： 
     • 分泌型蛋白，結構較為保守，部分蛋白含核定位信號（NLS），可進入宿主細胞核。
   • 分子量： 
     • NcGRA1：約 15-18 kDa；
     • NcGRA7：約 22-25 kDa。
   • 功能：分泌至納蟲泡內或宿主細胞質中，參與修飾納蟲泡微環境，調控宿主細胞代謝和基因表達。

5. 其他功能蛋白

   • 熱休克蛋白（HSPs）：如 HSP70、HSP90，分子量約 70-90 kDa，參與蛋白折疊和應激反應。
   • 代謝相關酶：如乳酸脫氫酶（LDH），分子量約 35-40 kDa，參與蟲體能量代謝。

• 常見分子量范圍：多數功能蛋白分子量在 15-90 kDa 之間，小分子蛋白（如 GRA1）約 15 kDa，大分子蛋白（如 HSP90）可達 90 kDa。
• 檢測方法：
  1. SDS-PAGE 電泳：分離不同分子量蛋白，結合 Western blot 可鑒定特異性抗原。
  2. 質譜分析（MS）：精確測定蛋白分子量及氨基酸序列，常用于新蛋白鑒定。
  3. 生物信息學預測：通過基因序列推導蛋白分子量（如通過 NCBI 或 Uniprot 數據庫查詢）。

1. 診斷標志物： 
   • SAG1、GRA7 等蛋白因免疫原性強，常用于 ELISA、免疫熒光（IFA）等診斷方法，檢測動物血清中的特異性抗體。
2. 疫苗研發靶點： 
   • NcSAG1、NcROP2 等蛋白可誘導宿主產生保護性免疫反應，是亞單位疫苗的候選抗原。
3. 致病機制研究： 
   • ROPs 和 GRAs 通過調控宿主細胞信號通路（如 NF-κB、MAPK 通路）促進蟲體存活，是研究寄生 - 宿主互作的關鍵分子。

• 進展：重組 NcSAG1 蛋白已用于犬新孢子蟲病的血清學診斷，部分 ROP 和 GRA 蛋白在疫苗臨床試驗中顯示出潛力。
• 挑戰：犬新孢子蟲蛋白的免疫逃逸機制復雜，單一抗原的診斷或疫苗效果有限，需結合多蛋白組合策略。

犬新孢子蟲蛋白通過多樣化的結構和功能參與蟲體的入侵、生存及免疫逃逸，其分子量和結構特征為疾病診斷、疫苗開發及機制研究提供了重要依據。未來需進一步探索多蛋白協同作用機制，以提升診斷準確性和疫苗保護效率。