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如何為不同應(yīng)用場(chǎng)景選用不同靈敏度的支原體檢測(cè)試劑盒!

瀏覽次數(shù):427 發(fā)布日期:2025-5-12  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
支原體檢測(cè)是細(xì)胞培養(yǎng)和相關(guān)生物制品的重要質(zhì)控方案,但不同的應(yīng)用場(chǎng)景需要選用不同的檢測(cè)試劑盒。試劑盒的選擇主要考慮幾個(gè)因素:

1、質(zhì)控的等級(jí)要求;
等級(jí)要求最高的,是細(xì)胞與基因治療產(chǎn)品的最終檢測(cè),成品檢測(cè)或放行檢。可選高靈敏度檢測(cè)試劑盒,需要極高的檢測(cè)靈敏度,至少達(dá)到10CFU/每劑,特異性要求也最高,必須無(wú)假陽(yáng)性,假陰性。相對(duì)應(yīng)地,樣本需要經(jīng)過(guò)復(fù)雜的前處理過(guò)程,包括支原體富集,核酸抽提,然后采用高靈敏度QPCR檢測(cè)試劑(擴(kuò)增45個(gè)循環(huán),陽(yáng)性閾值定為40個(gè)循環(huán))。高靈敏試劑對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作對(duì)環(huán)境和操作過(guò)程要求高,稍有疏漏,會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性或擴(kuò)增曲線翹尾。

對(duì)于細(xì)胞和基因治療產(chǎn)品中間研發(fā)過(guò)程的質(zhì)控,等級(jí)要求可以適當(dāng)放寬,靈敏度在100-10CFU是可以被接受的,并且很多情況下為了簡(jiǎn)化操作,往往采取直擴(kuò)的方案,即直接在QPCR體系中加入細(xì)胞上清或懸浮液進(jìn)行檢測(cè)(擴(kuò)增40個(gè)循環(huán),陽(yáng)性閾值定為35個(gè)循環(huán));若想進(jìn)一步提高靈敏度可采取濃縮裂解的
方案,即細(xì)胞上清通過(guò)高速離心后去掉上清,加入裂解液處理。

對(duì)于科研細(xì)胞房使用,可選用科研版直擴(kuò)檢測(cè)法,擴(kuò)增35個(gè)循環(huán),陽(yáng)性閾值定為32個(gè)循環(huán),實(shí)驗(yàn)對(duì)環(huán)境無(wú)菌要求不高,相應(yīng)地,靈敏度要求也不高,直接上清加樣,不需要對(duì)樣本特殊處理,靈敏度在1000-100CFU,如若要節(jié)約成本,可采取混和樣本檢測(cè)。

2、經(jīng)濟(jì)成本;
高靈敏QPCR檢測(cè)試劑盒,需要進(jìn)行樣本抽提,靈敏度高,需要配備熒光定量PCR儀,成本高;直擴(kuò)QPCR檢測(cè)試劑盒,不需要抽提和特殊樣本前處理,靈敏度中等,成本中等;科研版支原體檢測(cè)試劑盒,可混樣檢測(cè),成本較低。

3、操作的復(fù)雜程度
高靈敏QPCR檢測(cè)法需要濃縮,抽提樣本,可批量操作,操作難易程度中等,對(duì)實(shí)驗(yàn)人員有一定的要求,操作時(shí)間4-8小時(shí);直擴(kuò)QPCR檢測(cè)法和科研版直擴(kuò)法,操作比較簡(jiǎn)單,只需要加樣上機(jī)即可,操作時(shí)間1-3小時(shí)即可。

結(jié)合以上因素,總結(jié)如下:
高靈敏度:高靈敏支原體QPCR檢測(cè)試劑盒(成品放行檢,提高速率,但成本中等)。
快速便捷:直擴(kuò)支原體QPCR檢測(cè)試劑盒(平衡速度與成本,設(shè)備要求低,適合中間質(zhì)控環(huán)節(jié))。
成本至上:科研版支原體檢測(cè)試劑盒(節(jié)約成本,適合科研細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室)。
發(fā)布者:上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司
聯(lián)系電話(huà):021-33559491
E-mail:jiyn@biowing.com.cn

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