基因治療，也稱為細(xì)胞和基因治療(Cell and GeneTherapy)，是一種利用基因治療載體將外源治療性基因轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞，再通過外源基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，改變細(xì)胞原有基因表達(dá)從而達(dá)到治療疾病的目的。目前，國內(nèi)基于基因治療的生產(chǎn)工藝主要涉及兩個(gè)方向，第一類即基于溶瘤病毒進(jìn)行相關(guān)藥物開發(fā)，第二類即基于質(zhì)粒/病毒載體介導(dǎo)的基因療法。
 

溶瘤病毒不僅可以發(fā)揮直接由病毒介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷功能，也能通過破壞腫瘤血管系統(tǒng)從而達(dá)到間接殺傷腫瘤的目的。對(duì)于基因治療中的腺病毒AAV載體，其能夠長期存在于未分裂、最終分化的細(xì)胞群中而不被細(xì)胞當(dāng)做外源DNA降解，從而達(dá)到藥物遞送的作用。慢病毒LV載體則可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上，從而達(dá)到持久性表達(dá)目的序列的效果。
 

目前已上市的藥物中以AAV作為載體的代表性藥物例如諾華治療脊髓性肌萎縮癥（SMA）的Zolgensma，上市以來也取得了顯著反向，商業(yè)化較為成功。接下來就讓我們來看一下不同病毒的生產(chǎn)工藝吧！

01

溶瘤病毒生產(chǎn)工藝

病毒工藝開流程
 

02

質(zhì)粒/病毒載體生產(chǎn)工藝

一 慢病毒質(zhì)粒構(gòu)建流程
 

二 腺病毒質(zhì)粒構(gòu)建流程
 

三 腺相關(guān)病毒質(zhì)粒構(gòu)建
 

在上游細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)工藝不同會(huì)導(dǎo)致病毒產(chǎn)量或質(zhì)量的不同，目前對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)的工藝主要分為貼壁工藝及懸浮工藝。貼壁工藝是目前市場上主流的生產(chǎn)工藝，主要有細(xì)胞工廠、固定床、微載體工藝等。而懸浮工藝主要受限于細(xì)胞系和培養(yǎng)基，但易于放大，是較為理想的工業(yè)化生產(chǎn)模式。
 

胰酶作為細(xì)胞貼壁工藝中的關(guān)鍵物料之一，酶活性、有無動(dòng)物源等因素均至關(guān)重要。逐典TryPLUS消化液作為體外重組表達(dá)的胰酶類似物，與傳統(tǒng)胰酶的消化動(dòng)力學(xué)相似，但區(qū)別與傳統(tǒng)胰酶，具有純度高，細(xì)胞毒性低，細(xì)胞消化溫和等特點(diǎn)，產(chǎn)品無動(dòng)物源性，無需胰酶抑制劑，稀釋即可進(jìn)行終止，并且能夠兼容多種細(xì)胞培養(yǎng)體系，定能成為您細(xì)胞培養(yǎng)工藝中的絕佳幫手！