小鼠肺上皮細胞 TC-1培養說明書
 

培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用 75%

酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內嚴格無菌操作，將細胞瓶放入 37℃、5%CO2的培

養箱中靜置 3-4 小時以穩定細胞狀態后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行

不同倍數拍照保存（最好 40x,100x,200x 各一張），前三天照片是重要售后依據，不提供照

片默認收到狀態良好。（注意密封培養瓶放入培養箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用

原瓶的完全培養基，另外一瓶用自己配的完全培養基，以便進行對比培養）

三、細胞培養步驟

a、細胞傳代：
如果未超過 80%匯合度時，將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，留 5ml 完全培養基，放入 37℃、5%CO2孵箱培養；如果細胞密度超 80%，即可進行傳代培養，傳代具體步驟如下：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1-2ml 至培養瓶中，置于 37℃培養箱中消化 1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加 5ml 以上完全培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，使之完全脫落后吸出，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 完全培養基重懸。

4. 將細胞懸液按 1：2 的比例進行分瓶傳代（兩個 T25 瓶），補充新的完全培養基至 5-8ml/瓶，最后放入到 37℃、5%CO2的細胞培養箱中培養。

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 T25 培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次；

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3、 棄上清，沉淀細胞加入 1ml 的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。

細胞名稱

小鼠肺上皮細胞 TC-1

貼壁生長

無血清凍存液（貨號：C7001）

1640+10%FBS+1%雙抗

第一次建議 1:2 傳代

2 天換液

備注

用無菌離心管收集瓶子培養基，留作過渡對比培養

如果對比培養效果不好，建議直接購買我們的完全培養基NO.YS1054C

4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要將細胞轉入液氮罐中，則需在-80℃冰箱中存放 24 小時以上再轉入液氮罐中。

C、細胞復蘇：

1、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養基重懸，接種至 T25 培養瓶，放于 37℃,5%CO2細胞培養箱中培養；

4、第二天，換用新鮮完全培養基繼續培養。

四、注意事項：
有些細胞貼壁不牢，在運輸過程中細胞容易脫落，這是正�，F象。如脫落較多可將培養瓶所有培養液收集至離心管，1000rpm 離心 5min，收集上清作過渡培養（后期對比培養），沉淀加入胰酶 1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化 1-2 分鐘后，加 5ml 完全培養基終止反應。再離心，棄上清，加 1-2ml 完全培養基重懸。然后按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。

五、售后條款：

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發；

2. 細胞污染問題，請在收到產品 48 小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發；

3. 常溫發貨的細胞靜置 24 小時后，干冰凍存發貨的細胞復蘇后 24 小時后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態照片），重發；

4. 干冰凍存發貨的細胞復蘇后 24 小時后或常溫發貨的細胞靜置 4 小時候并且未開封，出現污染，重發；

5. 細胞活性問題，請在收到產品 7 天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發；

6. 細胞收到當天以及第 2,3 天請拍照，3 天未告知的，視為產品合格。4-7 天內出現問題有提供收到細胞前 3 天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的 50%收費重發。

1. 客戶造成細胞污染，不重發；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；

3. 非本庫推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；

4. 細胞狀態不好，未提供細胞培養前 3 天照片的，不重發；

5. 細胞培養時經其它處理的，不重發；

6. 細胞收到 2 天內，未告知，不重發；

7. 視具體情況而定