產(chǎn)品概述 product description
酵母活性檢測試劑盒是應(yīng)用新型的氧化還原指示劑阿爾瑪藍(lán)快速高靈敏度檢測酵母活性的比色檢測產(chǎn)品。 AlamarBlue是一種氧化還原指示劑，能根據(jù)酵母的代謝活性產(chǎn)生吸光度變化和熒光信號。這種測定是基于具有代謝活性的細(xì)胞將試劑轉(zhuǎn)換成熒光和比色指示劑的能力。 受損和無活性細(xì)胞具有較低的天然代謝活性，因此對應(yīng)的信號較低。  AlamarBlue在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無熒光性，而在還原狀態(tài)下，轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物，其吸收峰為530-560nm，而散射峰為590nm。在酵母細(xì)胞增殖過程中，細(xì)胞內(nèi)處于還原環(huán)境。進(jìn)入酵母細(xì)胞內(nèi)的活性檢測染料被代謝中間體及細(xì)胞色素類還原后釋放到酵母細(xì)胞外并溶于培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基從無熒光的靛青藍(lán)變成有熒光的粉紅色。最后用普通分光光度計(jì)或熒光光度計(jì)進(jìn)行檢測，吸光度和熒光強(qiáng)度與活性酵母細(xì)胞數(shù)成正比。染料經(jīng)過驗(yàn)證安全無毒，可以用于酵母細(xì)胞活性和酵母細(xì)胞增殖的定量分析細(xì)胞毒性研究。 AlamarBlue的無毒特性使酵母細(xì)胞可長期暴露于這種染料，因此可隨時(shí)間進(jìn)行測量或進(jìn)行終點(diǎn)測量。 AlamarBlue法采用單一試劑，可以連續(xù)、快速地檢測酵母細(xì)胞的增生狀態(tài)。由于AlamarBlue對酵母細(xì)胞無毒、無害，不影響細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成與分泌等活性，因此可以對同一批酵母細(xì)胞的增生狀態(tài)進(jìn)行連續(xù)觀察和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)觀察，因此有操作簡便和幾乎不干擾酵母細(xì)胞正常代謝的特點(diǎn)。

保存溫度
2-8℃避光

注意事項(xiàng)
1.長期不用可以-20℃保存。需要長期保存可以分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
2.凍存后融解時(shí)注意重新混勻。

有效期
一年

檢測方法
酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)

適用樣本
酵母

產(chǎn)品特點(diǎn)
1.使用方便：僅使用單一試劑；
2.靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好，線性范圍更寬；
3.結(jié)果穩(wěn)定：試劑本身穩(wěn)定性高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠；
4.無需放射性同位素和有機(jī)溶劑，對微生物毒性低；
5.適合于高通量藥物篩選。

產(chǎn)品應(yīng)用
酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)

儀器準(zhǔn)備
1.帶有450nm濾光片的酶標(biāo)儀 2. CO2培養(yǎng)箱

試劑準(zhǔn)備
1.PBS 2.HBSS
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)
1.正式實(shí)驗(yàn)前，建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入Alamar Blue試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。
2.整個(gè)過程均應(yīng)為無菌操作，因?yàn)槲⑸�物污染物同樣可以還原檢測試劑而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3.注意接種細(xì)胞濃度和加入檢測試劑后孵育時(shí)間。細(xì)胞濃度過高或孵育時(shí)間過長，會導(dǎo)致繼發(fā)性還原反應(yīng)，產(chǎn)生無色和熒光消失。
4.孵育時(shí)，須避光。
5.本產(chǎn)品可以使用熒光或分光光度檢測，但熒光的靈敏度高，實(shí)驗(yàn)誤差小，推薦使用熒光檢測。

使用方法
1. 收集待檢測的酵母細(xì)胞。
2. 用PBS或生理鹽水洗滌酵母細(xì)胞2次。
3. 將酵母細(xì)胞用PBS重懸，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為1x107/ml。
4. 96孔板中每孔加入200微升細(xì)胞懸液。將AlamarBlue活性檢測試劑于潔凈工作臺內(nèi)按10微升/孔加入微孔板中，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育2－12小時(shí)，液體顏色部分出現(xiàn)由藍(lán)變?yōu)榉奂t為止（如采用熒光分光光度法，只需孵育0.5－6小時(shí)）；
5. 在570nm測定吸光度，參考波長600nm。如無此濾光片， 可用565 nm 和 610 nm的濾光片替代。
6. 也可用熒光分光光度法檢測熒光強(qiáng)度，激發(fā)光波長在530-560 nm之間，發(fā)射光波長為590 nm。