基因醫療臨床試驗載體使用情況

截止2023年1月，與此相關的全球上市細胞與基因治療產品共計26項，慢病毒載體8項，腺相關病毒6項，腺病毒6項，逆轉錄病毒3項，單純皰疹病毒2項，埃可病毒1項。臨床項目中，以AAV為載體的基因治療試驗數量呈現迅猛增長之勢，在 ClinicalTrials.gov登記的以AAV為載體的基因治療臨床試驗從2016年的不足10個增至2018年11月的145個，再到2022年6月進一步提升至 239個。

病毒載體生產工藝

病毒載體生產需要穩健的工藝流程，且工藝可進行全面放大并符合法規要求。

上游工藝是得到數量充足，包裝完整病毒顆粒的過程，常見細胞主要有3種：基于人胚胎腎細胞HEK293的三質粒轉染系統；基于夜蛾昆蟲細胞(Sf9)的桿狀病毒表達載體系統；哺乳動物穩定細胞系等。細胞復蘇和DMSO去除后進入細胞培養階段，通過控制pH，DO，培養溫度等參數在培養基體系內得到適宜密度的細胞。在質粒轉染階段，控制質粒總量，轉染試劑/質粒質量比，細胞密度等相關工藝參數，在完成病毒包裝后進行收獲。

下游工藝是去除雜質和病毒載體濃縮，由于每種載體產品的特性不同，例如空殼/完整衣殼比例，滴度，吸附特性，聚集特性等，不可能開發一種通用工藝。典型步驟：細胞收獲液裂解后經澄清去除細胞碎片和顆粒物類雜質，需要考慮過濾器孔徑，載量，流速的參數，核酸酶消化進行酶切反應以去除宿主DNA或轉染殘留的質粒DNA，由于上游收獲的體積較大，通過超濾濃縮減少工作體積，并且要防止產物聚集；病毒載體在層析階段可能用到離子交換層析，親和層析或凝膠層析，需要充分考慮目標產品的特性進行工藝選擇；最后超濾再進行濃縮換液，除菌過濾和灌裝。