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凝膠法中的常用方法之試管法的簡介與步驟介紹

瀏覽次數(shù):1003 發(fā)布日期:2022-10-20  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

在凝膠法中,經(jīng)常使用的方法就包括試管法。

那在凝膠法中,試管法的使用方法是怎么樣的呢?


首先需要把供試品和鱟試劑等量加入試管中,輕搖晃使其充分混勻,再將該試管置于水浴中靜置,取出后再觀察該試管的凝膠是否形成。試驗時,需要作試驗管、陽性對照管、陰性對照管及陰性抑制對照管共4種,來作對照試驗。
 

1.試驗管
需要取出0.1ml的樣本和0.1ml的鱟試劑。水、注射液等一般樣本在試驗前是不需要進(jìn)行處理的,但是如果血液、腹腔滲出液等其他液體就必須在試驗前就進(jìn)行處理,因為這些樣本可能存在鱟試驗法反應(yīng)的抑制物。所用的鱟試劑需要在試驗前就對其以標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素進(jìn)行校準(zhǔn),且是可以進(jìn)行試驗的。


2.陽性對照管
分別取出0.1ml的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素和0.1ml的鱟試劑,在使用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素是應(yīng)以WHO標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)標(biāo)定。在實驗中應(yīng)用的內(nèi)毒素濃度需要根據(jù)鱟試劑的靈敏度來確定,一般來說,范圍在1~5 ng/ ml即可。

3.陰性對照管
只需取0.1ml的無熱原水和0.1ml的鱟試劑即可。

4.抑制對照管
需要取0.1ml的供試品和0.1ml的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素和0.2ml的鱟試劑。

上述四管均放入37℃孵育1~2小時觀察結(jié)果。如形成凝膠堅固,試管倒轉(zhuǎn)180度不變形,則記為(++);如混濁度和粘滯性明顯增加,呈膠體狀,但傾斜試管時變形,則記為(+);如液體流動自如,透明無變化或稍混濁,有少量顆粒細(xì)絮片狀物,則記為(-)。
 


以上對照的4支試管需要在37℃的環(huán)境中靜置1~2個小時,再對試管進(jìn)行觀察,以此來得出結(jié)果。如果試管中形成的凝膠是凝固的,且將試管翻轉(zhuǎn)180度都不會變形時,則該試管被記為(++);但是如果試管出現(xiàn)了混濁的情況而且試管內(nèi)還有粘滯性的情況,整體是呈膠體狀的,將試管傾斜時液體也會呈傾斜,則記為(+),如果整個試管的液體是非常流動的,且試管內(nèi)部呈透明色或者只有輕微混濁,且出現(xiàn)了些許顆粒細(xì)絮物,則記為(-)。
 

如果供試品中出現(xiàn)了抑制物,可以把供試品進(jìn)行處理,比如將其進(jìn)行稀釋,或者用其他方法將抑制物清除,再重新進(jìn)行檢測。如果這些方法都沒有效果的話,還可以采取其他細(xì)菌內(nèi)毒素檢測方法,比如家兔法(Rabbit pyrogen test)。

發(fā)布者:科德角國際生物醫(yī)學(xué)科技(北京)有限公司
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標(biāo)簽: 凝膠法 鱟試劑
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