Trizol法提取總RNA的流程及原理
提取原理：Trizol試劑的主要成分是苯/酚。苯/酚的主要作用是對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解，從而使細(xì)胞當(dāng)中的蛋白質(zhì)以及核酸物質(zhì)解聚而得以釋放。苯/酚雖然可以有效的使蛋白質(zhì)變性，但它不能完全抑制RNA酶的活性，因此Trizol中還加入了8－羥基喹/啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內(nèi)源和外源RNase（即RNA酶）。
Trizol試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA的試劑。在樣品的裂解液或勻漿中，Trizol能保持RNA的完整性。加入氯/仿(CHCl3)后離心，樣品能分成水樣層和有機(jī)層。而RNA存在于水樣層中。在收集上面的水樣層后，RNA可以通過異丙醇沉淀的方法來還原。在除去水樣層之后，樣品中的核酸和蛋白也能相繼以沉淀的形式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA，在有機(jī)層中加入異丙醇能析出有機(jī)層的蛋白。
Trizol試劑不但可用于小量樣品（組織：50-100mg；細(xì)胞：5×106），也可用于大量樣品（組織≥1g或細(xì)胞≥107），對(duì)動(dòng)物、植物、細(xì)菌、血液提取都適用，可同時(shí)處理大量不同樣品。反應(yīng)迅速，提取的總RNA沒有DNA和蛋白質(zhì)污染，可用于Northernblot、RT-PCR、RNase保護(hù)分析等。
RNA純化要求：
1.純化后不應(yīng)存在對(duì)酶（如逆轉(zhuǎn)錄酶）有抑制作用的物質(zhì)。
2.排除有機(jī)溶劑和金屬離子的污染。
3.蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子等的污染降到最低程度。
4.排除DNA分子的污染。
RNA提取的注意事項(xiàng)：
1.杜絕外源酶的污染。
（1）嚴(yán)格戴好口罩，手套。
（2）實(shí)驗(yàn)涉及的離心管，Tip頭，移液器桿，電泳槽，實(shí)驗(yàn)臺(tái)面等要徹底處理。
（3）實(shí)驗(yàn)所涉及的試劑/溶液，尤其是水，必須確保RNase-Free。
2.阻止內(nèi)源酶的活性。
（1）選擇合適的勻漿方法。
（2）選擇合適的裂解液。
（3）控制好樣品的起始量。
Trizol試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA的試劑。在樣品的裂解液或勻漿中，Trizol能保持RNA的完整性。加入氯/仿(CHCl3)后離心，樣品能分成水樣層和有機(jī)層。而RNA存在于水樣層中。在收集上面的水樣層后，RNA可以通過異丙醇沉淀的方法來還原。在除去水樣層之后，樣品中的核酸和蛋白也能相繼以沉淀的形式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA，在有機(jī)層中加入異丙醇能析出有機(jī)層的蛋白。
Trizol試劑不但可用于小量樣品（組織：50-100mg；細(xì)胞：5×106），也可用于大量樣品（組織≥1g或細(xì)胞≥107），對(duì)動(dòng)物、植物、細(xì)菌、血液提取都適用，可同時(shí)處理大量不同樣品。反應(yīng)迅速，提取的總RNA沒有DNA和蛋白質(zhì)污染，可用于Northernblot、RT-PCR、RNase保護(hù)分析等。
RNA純化要求：
1.純化后不應(yīng)存在對(duì)酶（如逆轉(zhuǎn)錄酶）有抑制作用的物質(zhì)。
2.排除有機(jī)溶劑和金屬離子的污染。
3.蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子等的污染降到最低程度。
4.排除DNA分子的污染。
RNA提取的注意事項(xiàng)：
1.杜絕外源酶的污染。
（1）嚴(yán)格戴好口罩，手套。
（2）實(shí)驗(yàn)涉及的離心管，Tip頭，移液器桿，電泳槽，實(shí)驗(yàn)臺(tái)面等要徹底處理。
（3）實(shí)驗(yàn)所涉及的試劑/溶液，尤其是水，必須確保RNase-Free。
2.阻止內(nèi)源酶的活性。
（1）選擇合適的勻漿方法。
（2）選擇合適的裂解液。
（3）控制好樣品的起始量。
標(biāo)簽：
Trizol
- Ni/光氧化還原雙催化助力構(gòu)建Csp2-Csp3鍵
- 細(xì)胞角蛋白標(biāo)記物在肺癌、間皮瘤和胸腺瘤診斷中的應(yīng)用
- 霍亂毒素的結(jié)構(gòu)、功能和致病機(jī)制及在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用
- 使用Streptozotocin構(gòu)建大小鼠糖尿病模型的機(jī)制及其應(yīng)用案例
- 微生物快速檢測(cè)方法分類介紹
- 趨化因子Chemokines的分類結(jié)構(gòu)、功能及在臨床中的應(yīng)用
- CEACAM6在腫瘤中的作用機(jī)制及靶向藥物研發(fā)進(jìn)展
- CDX2在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及臨床應(yīng)用價(jià)值
- 陶術(shù)生物技術(shù)講座預(yù)告：人工智能藥物設(shè)計(jì)的實(shí)用方法
- 暑期福利,勤翔ECL化學(xué)發(fā)光液試劑、核酸染料買二送一
- 美德聲推出分子生物學(xué)診斷解決方案，含多款檢測(cè)試劑
- 尚睿生物618產(chǎn)品年中大促,免費(fèi)試等活動(dòng)鉅惠來襲
- MCE攜手華東師范大學(xué)打造AI藥物探索聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室
- 棱鏡泰克19款流式試劑獲證，產(chǎn)品矩陣擴(kuò)至51款
- 美德聲推出多款基于新一代測(cè)序技術(shù)的體外診斷試劑盒
- 默瑞生物VivoMatter基質(zhì)膠產(chǎn)品試用活動(dòng)進(jìn)行中
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com