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生物3D打印應用:構建體外腫瘤微環境

瀏覽次數:1758 發布日期:2022-8-4  來源:锘海生命科學
神經母細胞瘤(Neuroblastoma)是兒童、嬰幼兒較為常見的一種顱外腫瘤。其典型的特點是后期惡性化程度較高,預后較差。為保證藥物具有針對性,提高治愈率,目前推薦的一個策略是在組織模型中確定病人對該藥物的特異性反應。因此,構造一個具有腫瘤微環境的特異性組織模型就顯得尤為重要。
 
目前,構建腫瘤微環境的一個主要難點在于如何觸發其形成血管并發生腫瘤血管化(Tumor-vascularization)。已有的嘗試主要為結合內皮細胞和間葉干細胞,使其提供支撐作用并在立體水凝膠中形成血管。
 
而在該文獻中,作者Daniel Nothdurfter等人將生物3D打印與流體芯片(Fluidic chip)相結合,開發了一種全新的灌注和微血管化的腫瘤微環境模型(Perfused and micro-vascularized tumorenvironment model)。在文章中,作者首先使用激光雕刻聚甲基丙烯酸甲酯(Polymethylmethacrylate,PMMA)薄片,使其中心具有一個圓形孔(模擬腫瘤微環境)、兩側各有兩條槽(模擬血管);同時,使用regenHU生物3D打印機3DDiscovery BioSafety的細胞親和性打印頭以噴墨的方式將含有細胞的水凝膠均勻噴灑在孔及兩側血管槽內,以形成微環境的主體;為保證血管空腔的形成,作者也使用了犧牲材料Pluronic F-127——一種低溫呈液態,高溫呈凝膠狀的材料——結合打印機的擠壓式打印頭,在凹槽內鋪設血管。之后繼續用含有細胞的水凝膠覆蓋,降溫使Pluronic F-127融化流出,即可得到具有空腔、可流經液體的血管結構(圖1、圖2)。
 
圖1 文中提到的腫瘤微環境模型構建的三個步驟:激光雕刻流體芯片、生物墨水打印、形成可灌注的血管及腫瘤微環境


圖2 左:打印Pluronic F-127后的模型;右:降溫去除犧牲材料后,使用染色的PBS進行灌注的效果

 
根據該模型結構,作者嘗試使用一種明膠-甲基丙烯酸酯(Gelatin-methacrylate,GelMA)與纖維蛋白(Fibrin)混合基質搭配多種類型的細胞,模擬腫瘤微環境;同時,通過添加內皮細胞,以促進微血管的自發形成。結果表明,脂肪細胞(Adipocyte)或誘導多能干細胞(Induced pluripotent stem cells,iPSCs)來源的間充質干細胞(Mesenchymal stem cells)都可以誘導腫瘤微環境的形成。另一方面,在去除犧牲材料的管狀結構內表面涂上內皮細胞,可生長成致密的血管組織,形成組織屏障。
 
之后作者在打印過程中將患者來源的神經母細胞瘤球狀體添加到基質里,并培養超過兩周的時,成功展示了微血管被腫瘤球狀體吸引并生長的過程(圖3);而腫瘤球狀體一旦破裂或無法維持球狀,則腫瘤細胞會很快入侵周圍的微環境(圖4)。
 


圖3 添加了神經母細胞瘤球狀體(紅)的模型基質,分別在第1、6、12、16天的微血管(黃綠)生長情況(比例尺:200 μm)
 
圖4 腫瘤球狀體(紅)破裂后在微環境中的擴散情況(比例尺:第一行為200 μm;第二行為50 μm)
 
小結:該文獻介紹了一種微血管化的神經母細胞瘤的腫瘤微環境模型,其特點在于通過生物3D打印,可進行高度定制;同時結合了流體芯片,使其結構更加穩定、統一,形成了一個中等通量的生物制造平臺,有利于開展更為復雜、系統的實驗,在未來精準醫療的腫瘤血管生成和轉移研究中也能有很大的發揮余地。

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