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細菌內(nèi)毒素檢查法(定量檢測)之光度測定法

瀏覽次數(shù):1004 發(fā)布日期:2022-7-20  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負

細菌內(nèi)毒素檢查法(定量檢測)之光度測定法試驗應(yīng)在特定的儀器中進行,溫度一般為37℃±1℃。為保證濁度和顯色試驗的有效性,應(yīng)預(yù)先進行標準曲線的可靠性試驗以及供試品溶液的干擾試驗。當(dāng)試驗環(huán)境中發(fā)生了任何可能影響檢測結(jié)果的改變時,試驗的有效性應(yīng)重新檢測。
 


1.標準曲線的制備
用標準內(nèi)毒素配成溶液并制成至少3個濃度的稀釋液(稀釋度不得大于10),最低濃度不得低于所用鱟試劑的標示檢測限。每一稀釋步驟的混勻時間同凝膠法,每一濃度至少做3支平行管。同時要求做2支陰性對照。當(dāng)陰性對照在設(shè)定的時間內(nèi)不發(fā)生反應(yīng),將全部數(shù)據(jù)進行線性回歸分析。根據(jù)線性回歸分析,標準曲線的相關(guān)系數(shù)(r)的絕對值應(yīng)該大于或等于0.980.試驗方有效。否則須重新試驗。

2.細菌內(nèi)毒素檢查法(定量檢測)之光度測定法:
按“光度法的干擾試驗”中的操作步驟進行檢測。

使用溶液C生成的標準曲線來計算溶液A的每一平行管的內(nèi)毒素濃度。

選擇標準線中點或一個靠近中點的內(nèi)毒素濃度。制備溶液A、B、C和D。供試品和鱟試劑的加樣量、供試品和鱟試劑的比例以及保溫時間等,參照所用儀器和試劑的有關(guān)說明進行。每種溶液至少做2個平行管。

細菌內(nèi)毒素檢查法-試驗須符合以下三個條件方為有效:
  1. 系列溶液C的結(jié)果要符合“光度技術(shù)預(yù)試驗”下“標準曲線的可靠性試驗”中的要求。
  2. 用溶液B中的內(nèi)毒素濃度減去溶液A中的內(nèi)毒素濃度后,計算出的內(nèi)毒素的回收率要在50%-200%的范圍內(nèi)。
  3. 溶液D(陰性對照)在規(guī)定的反應(yīng)時間內(nèi)未檢測出內(nèi)毒素。

若供試品溶液所在平行管的平均內(nèi)毒素濃度乘以稀釋倍數(shù)和濃度后,小于規(guī)定的內(nèi)毒素限值,判供試品符合規(guī)定。若大于規(guī)定的內(nèi)毒素限值,判供試品不符合規(guī)定。

發(fā)布者:科德角國際生物醫(yī)學(xué)科技(北京)有限公司
聯(lián)系電話:4006871881
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