關于細胞標記和熒光素酶的特性，你了解多少？快搭上學霸問答順風車，跟我們一起儲備知識量吧！

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什么是熒光素酶

熒火蟲熒光素酶(Firefly Luciferase)和海腎熒光素酶(Rellina Luciferase)組成雙熒光素酶報告基因實驗系統（Dual-Luciferase Reporter Assay）。通過加入特定的熒光素酶底物，熒光素酶與底物反應過程中會發出生物熒光，然后可以通過化學發光儀測定反應過程中釋放的生物熒光，從而比較不同組間基因表達的差異。中喬新舟用的是螢火蟲熒光素酶，renilla是海腎。

 

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下面給大家普及一下可能會遇到的問題：

1.在體外的細胞培養中，為什么要經常用抗生素篩選？

1.在體外的細胞培養中，為什么要經常用抗生素篩選？體外培養過程中，不篩選也可以，只要時間不是很長， 接種代數不要很多。到目前為止，還沒有發現基因丟失的情況。但若接種的代數過多，建議用藥物篩選一段時間或從原始的細胞株培養以保證細胞發光的強度，中喬新舟的LUC 、GFP 、RFP及雙標記都使用puro抗性篩選。

‍2.底物熒光素(Luciferin）是如何進入小鼠體內的？需要多少？

熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進入小鼠體內的，約一分鐘就可以擴散到小鼠全身。常用方法是腹腔注射，擴散較慢，開始發光慢，持續發光長。若進行熒光素靜脈注射，擴散快，開始發光快，但發光持續時間很短。大部分發表的文章中，熒光素的濃度是150mg/kg 。20克的小鼠約需3mg的熒光素。

3.熒光素酶的發光特性如何？

通過腹腔注射老鼠后約一分鐘左右熒光素酶就開始發光，通常十分鐘后強度達到穩定的最高點。在最高點通常持續約20-30分鐘后開始衰減，約三小時后發光全部消失。通常最好的檢測時間是在注射后15 - 35分鐘之間，但建議實驗人員在做不同實驗模型前進行連續時間點發光曲線的繪制，以確定最高穩值的時間范圍。

 

4. 如何保證熒光素酶（Luciferase）的穩定性？

熒光素酶基因是插到細胞染色體上的，當細胞分裂、轉移、分化時, 熒光酶也會得到持續穩定的表達。

 

5. 標記的腫瘤接種以后，會發生 Luciferase 的丟失嗎？

丟失的可能性及量非常小，不會影響實驗結果。有一些實驗報道的結果中，標記的細胞在動物體內存活幾年的時間還可以持續發光，說明 Luciferase 基因的標記非常穩定。

 

6. 可以用腫瘤塊而不是細胞接種嗎？

可以先用標記的細胞在皮下接種，然后從皮下取出腫瘤塊進行原位接種。

 

7. 標記細胞與標記基因所用的啟動子有何不同？

標記細胞一般用在細胞內能穩定表達的啟動子, 顯示細胞的數目。標記基因一般用此基因的啟動子，與此基因平行表達, 顯示此基因的表達數目，中喬新舟使用的啟動子是CMV。

 

8. 熒光素酶的表達高低與所用啟動子的活性有關嗎？

有關，啟動子的活性高，則熒光素酶的表達高，啟動子的活性低，則熒光素酶的表達低。

 

9. 常用的熒光素酶？特性如何？

熒光素酶，Luciferase 和 Renilla 熒光素酶，二者的底物不一樣，前者的底物是 D-luciferin，后者的底物是 coelentarizine 。二者的發光顏色不一樣，前者所發的光波長在 540-600nm，后者所發的光波長在 460-540nm 左右。前者所發的光更容易透過組織，后者在體內的代謝比前者快。大部分的發表文章通常使用前者用作報告基因， 也有一些文章使用兩者進行雙標記。

 

10.  組織切片可以觀察到生物發光嗎？

可以，但熒光酶的體外活性保持時間比較短， 約幾十分鐘。有相關的文獻。

 

 

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都有哪些細胞株提供
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中喬新舟luc標記細胞部分現貨清單如下：

 

圖1. PC-9和PC-9-gfp-luc細胞傳代后Luciferase熒光值檢測結果

注：

1.建議后期用含puro（2~4ug/ml）的完全培養基維持培養；

2.強烈建議收到細胞后先進行細胞體外分析，及時向我們反饋；

3.由于本實驗室沒有進行動物實驗檢測，請務必在動物實驗前再次進行細胞體外分析，以免耽誤實驗；

4.檢測試劑盒使用Promega Bright-Glo Luciferase Assay System。

 

可以提供luc標記的定制服務 周期是3-4周 ‍