催產素對大鼠應激模型母性攻擊行為的影響

【摘要】 目的探究不同劑量的催產素對于Wistar孕鼠應激模型攻擊行為的影響。方法將40只孕鼠按隨機數字表分為實驗組(A、B、C)與對照組(D)，每組10只；其中，A、B、C三組每次強迫游泳應激前分別經腹腔給予o．3 mg／kg、1．0 rag／kg、2．0 mg／kg的催產素，D組給予等體積生理鹽水。各組待分娩第3天均進行母性攻擊行為測試，主要觀察母鼠的攻擊總數、撕咬次數、攀壓次數、攻擊潛伏期、攻擊持續時間等項目，比較各組攻擊行為的差異，并用高架十字迷宮對各組大鼠在開臂、閉臂的相關數據進行分析比較。結果A組與D組在攻擊持續時間和潛伏期方面有差異統計學意義[(147．60+23．92)s、(79．70_+9．88)s，P<0．05]，其他項目無差異統計學意義(P>0．05)；B組與D組除攻擊總數(P>0．05)外其他均有差異統計學意義『(3．10_+0，87)次、(13．60_+5．14)次、(91．30+9．74)s、(167．20_+30．02)s，P<O．01]；C組與D組各指標均有差異統計學意義[(6．40±1．34)次、(15．10+4．35)次、(23．70_+3．46)次、(49．80±5．53)s、(215．60+39．55)s，尸<0．叭]；A組與B組各指標有差異統計學意義(P<0．05)；B組與C組除攀壓次數(P>0．05)，其他均有差異統計學意義(P<O．01)。在高架十字迷宮中，A組進入開臂次數百分率和進入開臂時間百分率較D組均差異有統計學意義(百分率數值分別為o．47±0．13、0．13±0．05，P<0．01)，B組與D組差異統計學意義(P<0．01)，A組與B組差異有統計學意義(P<0．05)，B組與C組在進入開臂時間百分率中無差異統計學意義(P>0．05)。結論 催產素可正性調節應激對母性攻擊行為的影響，改善母仔親密性，且催產素在此過程中具有劑量依從性。

【關鍵詞】應激模型；焦慮；催產素；母性攻擊行為；高架十字迷宮

應激(Stress)，又稱應激反應，廣泛存在于一切生物體中。實驗和臨床研究證實，應激可以誘發多種行為的改變，如焦慮、抑郁、逃避／攻擊行為異常等；另外，應激還可激活神經內分泌系統，繼而引起糖皮質激素和兒茶酚胺水平顯著增高以及催產素少量的增加。催產素(Oxytocin，OXT)，又叫縮宮素，主要是由視上核和室旁核大細胞神經元合成的一種九肽神經內分泌激素，并通過下丘腦．垂體．性腺軸作用于中樞神經系統和外周神經系統，除了最為常見的促進子宮收縮和泌乳作用之外，最新國內外研究發現，還具有凋節社交、母性行為、抗應激的作用，而且孕婦體內催產素的含量與子女的親密度有很大的關聯性，因此，國外學者又稱其為“親密激素”。而母性攻擊行為(maternal ag—gression，MA)是近些年來國內外繼母愛行為研究之后又一復雜的行為學名詞，是指嚙齒類動物為了防御潛在的入侵者對幼崽構成的威脅而發揮的一種保護性行為反應，與母性行為密切相關引。據研究發現，MA與應激反應有關，并主要由體內的催產素進行調節，從而維持著種群的穩定和健康發展。本實驗通過強迫游泳建立孕鼠應激模型，進而研究MA的改變，并通過注射不同劑量的催產素來探討其是否可以通過抗應激來起到保護MA的作用。

材料與方法

一、材料

1．實驗動物與藥品：健康清潔級Wistar孕大鼠40只，體質量(260+30)g，大連醫科大學實驗動物中心提供，合格證編號：SCXK(遼)2008—0002，標準環境飼養。按照隨機數字表將40只孕鼠隨機分為A、B、C、D四組，每組10只。性成熟雄鼠20只，體質量(250+_25)g，作為人侵鼠。專用Wistar大鼠催產素注射液、o．9％生理鹽水由佳木斯大學生命科學中心行為學實驗室提供。

2．實驗儀器（由上海欣軟信息科技有限公司提供）：(1)強迫游泳筒：圓柱狀簡規格30 cmx50 cm(直徑×高)，水深40cm。(2)攻擊行為實驗箱：規格61 cmx 4lcmX51 cm，上方覆蓋兩塊透明玻璃板，里面均勻鋪上一層約l ctn厚的干燥木屑。(3)高架f字迷宮：由--x寸開臂(50 cmX10 cm)、一對閉臂(50 cm×10cmX40cm)和一個中央區(10cmxl0cm)組成。迷宮距地面50 cm。迷宮的底面和閉臂的墻面是由黑色的塑膠板構成的。

二、方法

1．造模：參照經典強迫游泳造模方法進行一。于孕期第14日至分娩當日期間，在造模前分別給予A、B、C三組孕鼠腹腔注射0．3 rag／kg、1．0 111靜7kg、2．0 mg／kg催產素，D組給予等體積的生理鹽水。注射10 min后，將大鼠放人設定溫度(19～21℃)的強迫游泳筒內游泳10 min，每次游泳完畢后擦干，直接放回干燥的窩籠中。

2．行為學檢測(1)母性攻擊行為實驗：在安靜自然光線下進行，每次實驗前把母鼠和幼崽放入攻擊行為實驗箱內適應2 nlin，之后將入侵鼠放入箱內，開始視頻拍攝10 rain。觀察指標如下：攻擊總次數、攻擊潛伏期、攻擊持續時間、撕咬次數、攀壓次數。(2)高架十字迷宮實驗：在安靜黑暗的房間進行，先打開迷宮l：方100 cm處的的白熾燈；將母鼠放入實驗箱適應5 min后，放入迷宮指定位置檢測5 nlin(待放鼠于迷宮前10 s打開拍攝系統正式開始檢測)。觀察指標有常規指標和相關探究．危險評估指標。前者主要有進入開臂次數(open arm entry，OE)、進入開臂時間(openarm time，OT)、進入閉臂次數(C|ose arnl entry，CE)、進入閉臂時問(closearm time，CT)、OE百分率、OT百分率。后者主要有向下探究次數(head dipping，HD)、閉臂內后腿直立次數(rearing，RE)、伸展一注意行為次數(stretch—attend postures，SAP)。

3．統計方法：計數資料以均數±標準差表示，使用SPSS 17．0統計軟件對實驗數據進行方差齊性檢驗、單因素方差分析(One．way ANOVA)，組間比較用LSD．t檢驗及SNK-q檢驗。以P<0．05為差異有統汁學意義。

討 論
有關攻擊行為的實驗研究已有相應的報道，但數據并不完全一致，這可能與大鼠種群、刺激強度和時間、給藥方式、檢驗設備精密度等多種因素有關。本研究通過強迫游泳復制經典應激模型，繼而通過催產素(OXT)進行干預，從而誘導應激后的異常母性攻擊行為(MA)趨于正常化或減輕其應激癥狀進而促進其MA的發展。

在MA實驗中，觀察發現，生理鹽水對照組在撕咬次數、攀壓次數、總攻擊次數、攻擊潛伏期均有不同程度下降，這說明應激會破壞母鼠還擊入侵鼠的能力(在實驗中可見，入侵者在踩壓仔鼠時母鼠反應遲鈍)，符合之前的文獻報道；而給予不同劑量的OXT后，應激狀況不同程度改善，這也與已有的報道一致。但是至于是攻擊總數增多為主還是撕咬次數增多為主，目前尚無定論，亦有追逐次數增多為主的報道，這說明衡量攻擊行為的質量缺乏一定的標準。此外，生理鹽水組在實驗過程中可見食崽發生，從而直接導致了鼠崽數量的急劇下降，進而影響了母鼠的嗅覺反應和警覺反應，使得護仔能力大大降低，而干預組卻可以有效地降低食崽性，這是以前的報道提及甚少的，這或許與OXT的社會關系(增強彼此信任親密關系)作用有關。本研究發現，在撕咬次數、攻擊持續時間、攻擊潛伏期方面，A、B、C組之間差異有統計學意義，說明OXT對于應激后的MA保護作用可能具有一定的劑量依從性；至于OXT劑量是否可以繼續增加，需要考慮毒理學意義(OXT副作用主要為血壓升高、脈搏加快、水潴留等)，國內外文獻在嚙齒類動物研究中也提及甚少。事實上，在MA中也伴隨著母愛行為的發生，從而保證了幼崽的存活率以及物種的延續性。

憑借EPM發現，D組OT百分率和OE百分率明顯小于A組，進入閉臂時間(CT)也明顯延長，說明OXT可能有增加應激鼠進入開臂的作用。而通過OXT進一步注射(尤其是B組)發現，OT、OE、OT百分率、OE百分率明顯提高，說明OXT具有一定的抗焦慮抗應激效應和劑量依從性，這也可能與MA和強迫游泳雙重應激中OXT誘發的氨基酸(如GABA和谷氨酸)釋放增加或者是抑制了促腎上腺皮質激素釋放因子(CRF)以及相應受體2(CRFR．2)的結合而發揮上述作用的，而后者被視為OXT發揮抗焦慮和不斷適應應激環境的重要因素之一。此外，也有文獻報道，垂體后葉素(AVP)、雌激素受體和睪酮、5．HT、多巴胺等激素蛋白以及相應的大腦核團(如伏隔核、海馬)也可能參與OXT的抗應激生理作用。相對比B、c組而言，A組的實驗指標的提高程度雖小，但仍具有差異，這可能與OXT在血漿中的半衰期較短有關(大約3～10rain)。除此之外，根據Alica等人。制定的EPM使用規范，EPM還可檢測和評估與探索．危險有關的指標即HD、RE、SAP的次數，以此更全面地反映大鼠在開臂、閉臂、中央區的活動性、應對危險(如本實驗中的MA)以及應激程度，這已在國內外文獻中得到證實。D組HD、RE、SAP數量明顯少于c組，HD較A組也明顯減少，RE、SAP與B組差異顯著，說明應激大鼠的焦慮應激程度不僅與開臂區m-JI盲q次數比例有關，而且還與探索、應對危險行為之間存在著相關性，這在MA中得到了很好的體現。

總之，強迫游泳所引起的應激反應會破壞分娩后母鼠的母性行為的固有組分，即母愛行為(如建穴、叼仔、舔仔、梳理毛發、n甫乳等行為表現)和MA，并且對于MA的行為改變或生理心理沖擊(引發焦慮、抑郁、潰瘍性出血等)更大，這與國外文獻報道相一致。通過給予不同劑量的OXT可以對上述行為起到有效的干預或行為補償作用，而OXT對于MA的保護作用機制目前尚不明確，有待于進一步從分子學、基因學、心理學等方面著手探究。實驗中的確發現母子親密性提高，這可能是OXT治療的前景，可以保證種群的生存率。所以設想是否可以給那些母子關系不和諧的其他物種以至于人類一定的OXT，還需大量基礎和臨床實驗數據來確定。