DNA合成儀合成原理介紹

瀏覽次數：8981　發布日期：2014-4-30　來源：自己

DNA合成儀合成原理：

DNA的固相合成:即DNA3'端固定于基質上，然后沿3'向5'方向依次添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于應用DNA聚合酶的DNA合成。

合成過程:

第一個堿基的3‘末端固定在樹脂上，下一個堿基的5’-OH用二對甲氧三苯甲基DMT保護，堿基上的氨基用苯甲酸保護，然后對3‘-OH用氨基磷酸化合物進行活化。
1.1個堿基的5’-OH和下個堿基的3‘-OH形成亞磷酸三酯，

2.然后用碘氧化成磷酸三酯

3.加入二氯乙酸除去第二個堿基5’-OH上的保護劑DMT

循環進行加入下一個堿基合成完畢后

1.用苯硫酚除去5’-OH上的保護劑DMT

2.用濃氫氧化銨將片段與固體樹脂斷開，洗脫
3.用濃氫氧化銨在加熱的條件下除去堿基上的保護劑

4.除去氫氧化銨，真空抽干

5.液相色譜或者PAGE，回收片段最長的。

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標簽： DNA合成儀

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