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用WMicrotracker Arena系統測定左旋咪唑毒性

瀏覽次數:608 發布日期:2025-1-14  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

左旋咪唑是一種合成驅蟲藥,廣泛應用于獸醫學中,用于治療由線蟲引起的寄生蟲感染。作為一種驅蟲藥,它以線蟲乙酰膽堿離子通道受體為靶點(Martin等)。除了醫學應用外,左旋咪唑還廣泛應用于各個研究領域,特別是秀麗隱桿線蟲麻痹實驗。它能誘導這些線蟲癱瘓,這對于研究神經元功能和肌肉生理學來說是無價的。為了深入了解毒理學實驗,我們在下面舉一個利用這種化合物的例子。研究人員可以利用這個例子作為一個框架,使用不同的可溶性藥物進行他們自己的毒性研究。

材料:
帶蓋6孔板,NGM培養基,M9緩沖液,左旋咪唑-原液:100mM水溶,同步成蟲種群,WMicrotracker Arena設備。


簡易操作:

 
微孔板制備:

  • 按照標準程序制備NGM;
  • 在加入鹽和膽固醇后將左旋咪唑立即加入55°C的NGM瓊脂溶液中;
  • 左旋咪唑片未接種OP50中;
  • 制備后兩周內可使用,保存在4°C的容器中;
  • 測定是在實驗開始前已將模板降到室溫的板上進行的。

 
Protocol步驟:

1,在NGM培養皿中培養同步的成蟲種群(OP50);
2,用M9緩沖液將蠕蟲從培養皿中取出,轉移到15毫升無菌試管中;
3,讓蟲子靜下來。倒入上清液,注意不要擾亂顆粒;
4,用5ml M9緩沖液進行清洗。短暫搖動或翻轉管子;
5,重復上述步驟。倒出上清,加入3ml M9緩沖液;
6,數一式三份,計數每10ul中蟲數,計算平均值;
7,制備懸浮液,得到[35蟲/10μl];
8,將10 μl蟲液轉移至6孔板;
9,使用wMicroTracker ARENA觀察蠕蟲活動;

備注:至少進行3次技術重復,至少進行2次生物重復。

實驗結果如圖所示:

左旋咪唑對N2運動活性的劑量抑制反應曲線

評價不同濃度左旋咪唑(0µM(對照)、100µM和200µM)的治療效果。在6孔板中,每孔挑選35個年輕成蟲N2。在23℃下記錄4小時的運動活動。數據代表四個獨立實驗的平均值,進行重復實驗。

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