顯微成像應用案例：徠卡多色圖像集錦

瀏覽次數：898　發布日期：2024-9-23　來源：徠卡顯微鏡

用徠卡顯微系統儀器拍攝的多圖攝像

熒光多色顯微技術是多重成像技術的一個方面，可在同一實驗中觀察和分析同一樣本中的多種元素--每種元素都標記有不同的熒光染料。這不僅能提高實驗效率，還能獲得更可靠、更有意義的結果，從而了解細胞和組織內的復雜過程。本圖集展示了使用THUNDER和STELLARIS平臺獲得的標有多種熒光探針的樣本圖像。

使用 STELLARIS 共聚焦

平臺進行多色成像

STELLARIS共聚焦顯微鏡系列配備了新一代白光激光器（WLL）。搭配Power HyD檢測器，STELLARIS可提供完全自由的光譜。您可以根據自己的研究需要進行多色實驗，而不受儀器的限制。通過使用TauSense工具集，STELLARIS還可以利用熒光染料/蛋白質基于生命周期的特性，為多色成像增加一個新的維度。

用TauSTED對活細胞中的細胞骨架和細胞膜

進行成像

使用STELLARIS STED采集的圖像。

TauSTED 775解析了用SiR-tubulin（熒光 - Spyrochrome）標記的錯綜復雜的細胞骨架網絡，以及用CF594（青色 - Biotium）標記的運輸囊泡。

內吞途徑和線粒體動力學

使用STELLARIS STED采集的圖像。

用MitoView Green標記的線粒體。用CellBright NIR750標記的膜泡。使用TauSeparation，根據與囊泡內吞成熟相關的pH值成熟步驟進行壽命成分分離，揭示不同的內吞步驟。

用TauSTED對活細胞中的細胞骨架和細胞膜

進行成像

使用STELLARIS STED采集的圖像。U2OS細胞上的活細胞TauSTED，使用了肌動蛋白（SiR-actin，熒光）、微管（SPY555-tubulin，青色）和膜（CF488A偶聯WGA，綠色）標記。SiR和SPY可從Spirochrome購買。CF染料可從Biotium Inc.比例尺：10 微米。

用TauSTED對活細胞中的細胞骨架和細胞膜進行成像。

擬南芥（Arabidopsis thaliana）的根-下胚軸交界處

擬南芥（Arabidopsis thaliana）的根-下胚軸交界處：肌動蛋白（Lifeact-Venus，Era 等人，植物細胞生理學，2009年）、葉綠體（內源性熒光）和細胞壁（碘化丙啶）。通過使用基于熒光壽命的信息，可以觀察到肌動蛋白網絡、細胞壁和葉綠體的復雜細節。圖片使用TauContrast技術獲取。樣本由海德堡大學COS的Melanie Krebs博士提供。

揭示細胞骨架和線粒體之間的相互作用

用SiR-Actin（657 - 740 納米檢測范圍）、AF750-Tom20（760 - 790 納米）、AF790-Tubulin（810 - 850 納米）標記的 Cos-7 細胞。

左圖：傳統砷化鎵檢測器所見。
右圖：配備Power HyD R檢測器的STELLARIS 8所見。光譜結果（右）顯示了實驗中使用的熒光團的激發光譜（灰色）和發射光譜（紅色）。
樣品提供：Jana Döhner 博士和 Urs Ziegler 博士。Urs Ziegler，蘇黎世大學。

充分利用活細胞實驗：更少曝光，更多信息

使用傳統共聚焦顯微鏡對同一樣本中的多個不同熒光標簽進行成像時，通常需要對每個顏色通道進行順序成像，以避免光譜串色而降低圖像質量。在動力學實驗中，這意味著由于獲取每個時間點所需的時間增加，您可能會錯過快速的動態事件。此外，樣品在臺上停留的時間更長，因此在實驗過程中保持細胞健康更具挑戰性。下圖是用4種不同的熒光團標記的活體 HeLa 細胞拍攝的圖像，用于識別細胞核、肌動蛋白、微管蛋白和質膜。有了STELLARIS，就可以一次性采集所有4個通道的圖像，而不必對細胞連續成像4次。

TauSTED 775解析了用SiR-tubulin（熒光 - Spyrochrome）標記的錯綜復雜的細胞骨架網絡，以及用CF594（青色 - Biotium）標記的運輸囊泡。

LAS X Navigator--用于實驗的GPS

上圖：小鼠胚胎（如第 X 頁所示）的201張拼接圖像的詳細視圖（單張圖像）。
(第 X 頁所示）的細節圖（單張）。透射光檢測器（TLD）成像，通過488納米、561納米和660納米的激發波長創建 RGB 疊加圖像。
488nm、561nm和638nm波長的激發，生成RGB疊加圖。
底部：與上述相同視場的TauContrast圖像，最大投影展示。

以 "光速 "探索

用LIGHTNING對細胞內成分進行成像。