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FRAP蛋白晶體成像系統(tǒng)在排除膜蛋白非結晶條件中的應用

瀏覽次數(shù):1620 發(fā)布日期:2023-12-14  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

存在的問題:

完整膜蛋白結晶最佳條件的發(fā)現(xiàn)對于研究者而言非常耗時。晶體可能需要兩周或更長時間才能形成,這使得優(yōu)化結晶生長條件的過程極其漫長。

 

光漂白后的熒光恢復 (FRAP)

預篩選結晶條件以消除那些不利于結晶的條件。用戶可以在短短 30 分鐘內(nèi)將這些條件縮小范圍至一小部分利于結晶的條件。

 

如果蛋白質(zhì)不能在脂質(zhì)立方相中擴散,

那么它們就不可能形成晶體。

 

FRAP 系統(tǒng)可以檢查蛋白質(zhì)制劑,節(jié)省用戶時間

為獲得完整的膜蛋白,F(xiàn)RAP 在廣泛不同的鹽晶條件下對 96 孔板進行檢測。在大多數(shù)條件下良好的光漂白熒光恢復意味值得用該樣品進行 LCP 結晶。

 


 

FRAP 可以用來確定哪種蛋白質(zhì)制劑最好

我們使用兩種不同的去污劑對一個完整的膜蛋白進行純化,因此在廣泛的結晶條件下 FRAP 熒光恢復存在顯著差異。這里 LDAO 被證明是一種更適合純化的去污劑,應該用于結晶試驗。如果在 SDS 中純化的蛋白質(zhì)幾乎沒有遷移率,那么它就不會結晶。

 

 

在 30 分鐘內(nèi)篩選 96 種結晶條件

FRAP 能夠自動分析 96 孔 LCP 板以確定每個液滴的遷移率。每個孔都通過聚焦的激光點進行光漂白,并測量固定時間點后的熒光恢復。而在液滴中可遷移的蛋白質(zhì)百分比表明是否可能發(fā)生結晶。

  1. FRAP 成像儀發(fā)射光漂白激光脈沖,該脈沖從二向色鏡反射,通過激發(fā)濾光片,再被第二個二向色鏡反射,從而漂白樣品。

  2. LED 通過聚光鏡照射光線,光線沿著與激光相同的路徑,照亮樣品。

  3. 接著處理熒光圖像以確定表明蛋白質(zhì)遷移率的光漂白點的恢復時間。

 

 

數(shù)據(jù)分析容易

系統(tǒng)提供的軟件組用于跟蹤和分析每個實驗的得分。得分以顏色編碼的概覽顯示,讓用戶一眼就能識別出結晶孔。用戶可以在軟件中對結晶孔進行標記,以備日后參考。在上面的例子中,H8 孔蛋白遷移率最高,最有可能生長晶體。D12 孔遷移率為零,最不可能生長晶體。

發(fā)布者:富默樂國際貿(mào)易(上海)有限公司
聯(lián)系電話:021-61562961
E-mail:tiefeng2@163.com

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