一、概念

電化學發光 (Electrochemiluminescence ) 是繼放射免疫、酶免疫、熒光免疫、化學發光免疫測定以后的新一代標記免疫測定技術。電化學發光法是一種在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，包括了電化學和化學發光兩個過程。電化學發光 (Electrochemiluminescence ) 可以應用于所有的免疫測定，電化學發光能取代第一代放射免疫的靈敏度，又繼承了第二代酶聯免疫的通量方便，因而廣泛被全球大量用戶所認可和使用，從被載入了免疫分析技術發展的史冊。
 

免疫分析技術發展的三代

二、MSD電化學發光原理

MSD（Meso Scale Discovery）的電化學發光技術是基于Elisa原理的升級，在96/384微孔板（石墨材質，背面帶有電路）的板底包被捕獲抗體，加入待測樣本，加入三聯吡啶釕標記的檢測抗體，形成雙抗體夾心復合物，將微孔板放入MSD儀器中，微孔板通電后，三聯吡啶釕發生化學反應， 由[Ru(bpy) 3 ] 3+變成 [Ru(bpy) 3 ] 2+，再回到[Ru(bpy) 3 ] 3+，并且這個循環反應可以持續進行，在此過程中會釋放出光子（620nm檢測）被儀器中的CCD相機捕獲，釋放出的光子和待測物的濃度成正比。

三、MSD多因子檢測原理

（1）MSD通過點陣技術，在96/384石墨電極板里的每個孔的不同spot中預先點印上1-10種捕獲抗體，從而實現1-10個指標/每孔的檢測。

通常MSD的V-PLEX試劑盒通過該方法實現多因子檢測。
 

（2）借助linker將捕獲抗體帶到一個孔中的不同區域內，在一個孔內實現多因子檢測。通常U-PLEX試劑盒就是通過該方法實現多因子檢測。

1. Linker與捕獲抗體連接：

U-PLEX plate每個孔內有1-10個spot，每個spot內有基座分別與不同linker匹配；linker有生物素結合區域，可以結合生物素化的捕獲抗體。因此捕獲抗體可以被linker帶到相應的spot里。

例如檢測四種指標，第一步，將四種指標對應的生物素化捕獲抗體與四種linker，分別在四支管子內混合，分別完成linker與捕獲抗體的偶聯，之后加入stop solution終止反應。

2.  Linker帶著生物素化捕獲抗體到一個孔的不同區域：

將四種Linker連接的捕獲抗體混合制成混合液A。

將混合液A包被U-PLEX plate，不同的Linker就會帶著連接的捕獲抗體到相應的spot中，完成在同一個孔內包被多種捕獲抗體，實現在一個孔內進行多指標檢測（最多可在一個孔中實現10種指標的同時檢測）

3.  后續流程同ELISA，完成實驗

在板內加入樣本進行孵育結合；

準備四種指標的檢測抗體混合液（抗體帶sulfo-tag標記），加入板內進行孵育結合；

加入read buffer讀板液上機讀板檢測，根據各個spot相應位置的光信號值，定量各檢測指標的濃度。

通常MSD的U-PLEX試劑盒通過該方法實現多因子檢測。

PLEX操作視頻：

https://mp.weixin.qq.com/s/q0oB3zJ_PYzT6LfuUNu2Cg