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如何快速啟動(dòng)siRNA文庫篩選的相關(guān)問題與解答

瀏覽次數(shù):708 發(fā)布日期:2023-1-31  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

客戶:小刀,我之前有聽過你的siRNA文庫講座,還挺感興趣的
客戶:但是我們實(shí)驗(yàn)室沒有高通量?jī)x器,也可以做siRNA文庫篩選嗎?會(huì)不會(huì)太麻煩?
DAO:不會(huì)很麻煩,小幾十個(gè)基因的篩選排槍就能搞定,高通量?jī)x器一般適用于幾百、幾千或幾萬個(gè)基因的篩選


客戶:之前沒做過siRNA篩選,我有點(diǎn)怕我操作不好
DAO:這個(gè)不用太擔(dān)心,基本的轉(zhuǎn)染操作和單基因一致,只不過通常是用96孔細(xì)胞板進(jìn)行,所以需要多些細(xì)心和耐心


客戶:好的,那我可以試試看
客戶:對(duì)了,你講座中提到的成品文庫,我看了下,這些基因家族分類和我想要研究的方向不能夠完美匹配呢
DAO:你說的是這些亞庫嘛?
 

DAO:這個(gè)問題不大,圖中所有文庫的基因列表我都有,你可以看看你的研究方向和哪套庫靠的上,然后挑選自己喜歡的基因進(jìn)行定制。又或者你自己有想要研究的一些基因,可以直接發(fā)我,畢竟只要有5個(gè)基因就能定制文庫了,價(jià)格還劃算


客戶:能定制還蠻不錯(cuò)的,那我來看看能不能湊些基因出來給你
客戶:但是定制的規(guī)格、產(chǎn)品形式又是什么樣的?是不是和成品不一樣啊?
DAO:基本是一樣的,但是定制更靈活:規(guī)格上有0.1, 0.25, 0.5, 1, 2 nmol 5種可選,siRNA你可以選擇4條分裝的,也可以選擇SMARTpool形式的


客戶:等等等,什么叫4條分裝,SMARTpool又是什么?
DAO:哈哈,講座沒認(rèn)真聽吧,是這樣的,每個(gè)基因我們會(huì)提供4條不同的siRNA,4條分裝就是每條siRNA單獨(dú)放1個(gè)孔里,那SMARTpool就是把4條siRNA預(yù)混后共同放在1個(gè)孔里


客戶:那我要怎么選啊?哪種更合適呢?
DAO:做多個(gè)基因篩選的話,我是更建議選SMARTpool的,這樣你的轉(zhuǎn)染工作量就減少了3/4,而且SMARTpool沉默效果更好,畢竟4條不同的siRNA共同發(fā)揮作用,大哥不行還有二哥、三哥和四哥呢(奸笑的表情包)


客戶:那沉默效率怎樣?有沒有做過驗(yàn)證啊?萬一效果不好怎么辦?
DAO:這個(gè)可以放心,所有的siRNA出廠前都有做過驗(yàn)證,而且是有沉默效率保障的,保證每個(gè)基因?qū)?yīng)的4條siRNA中至少有3條在mRNA水平上有≥75%的沉默效率,如果效果不好,提供陰陽性對(duì)照、siRNA的qPCR數(shù)據(jù),廠家是會(huì)賠付的


客戶:OKK,那這個(gè)規(guī)格我咋選呢,我是想買個(gè)0.1nmol的,但是具體能做幾次篩選我有點(diǎn)慌?
DAO:和我想到一起去了,如果只是利用文庫做一下基因的初篩,那0.1nmol絕對(duì)夠用了
DAO:關(guān)于能做幾次篩選,這個(gè)取決于你最終轉(zhuǎn)染時(shí)siRNA的使用終濃度了。以96孔板篩選,25nM終濃度,每個(gè)基因3個(gè)復(fù)孔為例,大概可以支持個(gè)10次篩選左右


客戶:這樣啊,那0.1nmol確實(shí)夠用了,篩到以后,我再單獨(dú)購買大規(guī)格的siRNA就是了,沒必要篩選的時(shí)候就買那么多,不劃算
DAO:對(duì)的,就是這個(gè)意思


客戶:行,那我了解了,我現(xiàn)在就去找找基因去,你把泛素化集合相關(guān)的基因列表發(fā)我,我看看選一些,再把我手頭上有的基因列一列,到時(shí)發(fā)你
DAO:好噠,這是基因列表,請(qǐng)查收
 
客戶:謝謝

發(fā)布者:上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司
聯(lián)系電話:4008-168-068
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