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關于鱟試驗法中假陽性結果的解決方法

瀏覽次數:873 發布日期:2022-11-11  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

樣品中混入細菌內毒素發生凝集,由形成凝膠的有無來檢測樣品中的內毒素,然而鱟試劑除了內毒素反應外,它同時也會對內毒素以外的其他物質存在凝集反應。因此,勢必會形成假陽性或假陰性的實驗結果。這就是鱟試驗法中的特異性問題。

對于假陽性結果的問題,可以說十分復雜。因為對于大多數樣品來說,主要都為假陰性情況較多,而對于假陽性結果的判斷和排除是很困難的。當我們對一個樣品用鱟試驗法檢測出陽性結果時,一可以說是由于內毒素超過限值所引起,二也可以理解為假陽性結果。因此我們在實驗時要特別注意區分。

 

在假陽性結果的研究過程中,最突出的是有關G因子反應系被激活所形成的凝膠化反應,即一般的鱟試劑由于含有G因子也可被(1,3)-β-D-glucan(葡聚糖)所激活而使產生凝集反應,從而形成假陽性結果。

關于(1,3)-β-D-glucan:它是在1981年由Adinuma所發現一種抗癌藥,能使鱟試劑產生凝固。國外報道該物質在10ng/ml時就可使鱟試劑凝固。根據我們的試驗發現不同廠家的鱟試劑可在2.5 ~10ng/ml范圍內使鱟試劑凝固。該物質廣泛存在于擔子菌、真菌、地衣類、酵母和藻類的菌體成分中。另外,某些用人造纖維造的人工腎透析膜上也含有類似物質,但它可引起家兔升溫。

(1,3)-β-D-glucan對熱極為穩定。高壓121℃并不能使其滅活。需250℃2小時加熱滅菌才能使其滅活。因此,要想防止假陽性結果的產生,就必須要排除(1,3)-β-D-glucan,使其不能激活G因子而形成凝膠。

國外在80年代后對此進行了許多的研究和改進。目前已開發出僅對內毒素起反應的專一鱟試劑。只與內毒素起反應的鱟試劑有:日本生化學工業株式會社生產的Endospecy,它是將東方鱟裂解液中各組分提取后重組,重組時不加G因子,另一種是日本和光純藥株式會社生產的ES =Ⅱ,它是美洲鱟裂解液中加入大刃羧甲基curdaln封閉G因子。同時國外也開發出只與(1,3)-β-D-glucan起反應的鱟試劑:由蠶中提取而來的新型的SLP試劑。(和光)以及日本化學工業株式會社生產的Gluspecy。

對于大多數樣品來說,由于使用特異性鱟試劑與非特異性鱟試劑對其結果是沒有差異的。因此在一般情況下可以不必考慮,只有在確實認定有干擾時,才考慮使用特異性鱟試劑以排除干擾。

發布者:科德角國際生物醫學科技(北京)有限公司
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