Q1：如何規劃我的第一個單細胞實驗？

在早期規劃階段，您要考慮的因素很多，但樣本制備是一個重要的起點。您需要考慮的因素之一是處理的樣本類型。是組織、細胞懸液，還是全血？是否需要解離、富集或純化步驟？此外，您還要考慮每個實驗條件所需的樣本數量，以及是否需要生物學重復。縮小到單個樣本，您應當考慮每個樣本需要多少個細胞才能獲得所需的結果，這也將為后續的樣本富集、純化和質控方法提供信息。

圖1 單細胞實驗流程

Q2：單細胞測序是否需要生物學重復？

由于存在遺傳和環境因素的影響，個體間會存在差異，因此實驗設計需要引入生物學重復消除該差異。近年來，單細胞測序文章對生物學重復的要求也越來越高，例如人的樣本，其異質性很高，建議每組盡量保證5個樣本的生物學重復。而動物模型的樣本也盡量保證每組3個生物學重復。
 

Q3：每個樣本需要多少個細胞？

目前，對單細胞懸液需要先進行質檢和計數，一般要求細胞數目≥5萬，細胞存活率≥ 80%，將檢測合格的細胞經洗滌、重懸制備成合適的細胞濃度 700~1200 cells/ul，以備進行 10x Genomics Chromium™ X系統上機操作。

中科搭載10×Genomics最新的單細胞儀器平臺Chromium X有16個通道，每個通道最多可以捕獲2萬個單細胞。通常每個樣本捕獲6K-1w的細胞數目就可以基本滿足實驗分析需求。是否需要更大的細胞量，還是需要根據老師實驗目的來決定。

圖2 Chromium X芯片及細胞捕獲示意圖
 

Q4：單細胞測序為何要選擇10×Genomics？

在目前群雄逐鹿的單細胞市場中，為什么我們要選擇10×Genomic，原因如下：

A：10×Genomics單細胞技術助力科學家發表的文章數量遙遙領先。這也反映出廣大科研工作者對于10X平臺的認可度遠高于其他單細胞平臺以及10X單細胞結果的穩定性、可靠性以及客觀性。

圖3 10×Genomics文章數量
 

B：更加全面的應用，滿足科研工作者單細胞多組學的需求。從單細胞轉錄組聯合空間組學，單細胞轉錄組聯合代謝組學以及單細胞轉錄組聯合蛋白組學等多維度多角度闡述表型發生過程中的細胞和分子調控機制。
 

圖4 10×Genomics多組學產品圖
 

C：更高的通量，更低的成本。縱觀單細胞測序文章，測得的細胞量越來越多，10×推出的Chromium X可實現一次上機拿到上百萬個單細胞；而Fixed RNA試劑盒，可以將單細胞樣本進行固定，通過多批次混樣，降低單個樣本的成本。

圖5 10×Genomics優勢圖
 

Q5：樣本類型不適合運輸怎么辦？

中科的單細胞實驗團隊可以為老師提供上門消化上機服務。無論時間，無論地點，僅需老師與我們提前預約，并確定老師能提供實驗所需儀器后，即可上門完成樣本的消化和上機實驗。