各位看官晚上好，一期一會的百奧賽圖知識擴展課堂又來嘍，今天小編帶來一種視覺享受的分子，言歸正傳，GITR（glucocorticoid-induced TNFR-related protein）是TNF受體超家族成員 ，在多種腫瘤模型中可表現出抗腫瘤效果。GITR是目前免疫學家感興趣的一種共刺激免疫檢查點分子。

那么接下來，咱們就一起瞧瞧這個因吹斯汀的靶點分子吧~

 

基因功能簡介

TNFRSF18（TNF受體超家族成員18）也稱為糖皮質激素誘導的TNFR相關蛋白（GITR），其在包括T細胞在內的許多免疫細胞上表達。作為T細胞的共同刺激信號，TNFRSF18在T細胞活化后被上調，進而促進T細胞增殖。已知CD25⁺/CD4⁺調節性T細胞可介導免疫耐受，而GITR激動劑抗體可逆轉這種免疫耐受，并在多種腫瘤模型中顯示出抗腫瘤作用。

 

 

Figure 1：Model of GITR–GITRL interaction dynamics during an immune response.

 

目前，GITR是免疫學家熱衷研究的共刺激檢查點分子，參與抑制Treg細胞的抑制活性，并延長效應T細胞的存活。百奧賽圖開發的B-hTNFRSF18(GITR) mice人源化小鼠為科學家們研發該靶點抗體藥物的有效驗證提供了有力的工具。

 

品系信息

 

 

qRT-PCR分析

 

通過qRT-PCR技術分析肝臟組織的的GITR基因在 mRNA水平的表達情況。

在C57BL/6與B-hGITR小鼠中，GITR基因表達并無顯著性差異(n=3)。

 

蛋白表達分析

   

通過流式細胞術分析了野生型（WT）C57BL/6和純合B-hGITR小鼠的脾細胞。

在WT C57BL/6中可檢測到小鼠GITR⁺細胞，而在純合B-hGITR小鼠中可檢測到人GITR⁺細胞。

 

通過流式細胞術分析了野生型（WT）C57BL/6和純合B-hGITR小鼠的Treg細胞。

在WT C57BL/6中可檢測到小鼠GITR⁺細胞，而在純合B-hGITR小鼠中可檢測到人GITR⁺細胞。

 

B-hGITR小鼠的白細胞亞群分析

 

從C57BL/6和B-hGITR小鼠（n=3）中分離出脾細胞。通過流式細胞術測試白細胞亞群的比例。 

結果表明，純合B-hGITR小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hGITR的人源化不影響T，B，NK，粒細胞，單核細胞，DC和巨噬細胞的分化。

 

從C57BL/6和B-hGITR小鼠（n=3）中分離出脾細胞。通過流式細胞術測試白細胞亞群的比例。 

結果表明，純合B-hGITR小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hGITR的人源化不影響CD45細胞中mCD4、mCD8以及T細胞中mCD4、mCD8的分化。

 

GITR抗體藥效驗證

 

將鼠結腸癌MC38細胞皮下植入雜合的B-hGITR小鼠中。

 

當腫瘤尺寸為約150±50mm³（n＝6）時，將小鼠分組。三種人GITR抗體以不同方式抑制腫瘤生長，證實B-hGITR小鼠模型是體內GITR抗體藥理功效研究的有力工具。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。

 

將鼠結腸癌MC38細胞皮下植入純合的B-hGITR小鼠中。

 

當腫瘤尺寸為約150±50mm³（n＝5）時，將小鼠分組。兩種人GITR抗體以不同方式抑制腫瘤生長，證實B-hGITR小鼠模型是體內GITR抗體藥理功效研究的有力工具。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。

 

B-hPD-1/hGITR mice

 

蛋白表達分析

通過流式細胞術分析了野生型（WT）C57BL/6和純合B-PD-1/GITR小鼠的脾細胞。

在WT C57BL/6小鼠中僅可檢測到小鼠PD-1⁺ T細胞，而在純合B-hPD-1/GITR小鼠中可檢測到人PD-1⁺ T細胞。

通過流式細胞術分析了野生型（WT）C57BL/6和純合B-PD-1/GITR小鼠的脾細胞。

在WT C57BL/6小鼠中僅可檢測到小鼠GITR⁺ T細胞，而在純合B-hPD-1/GITR小鼠中可檢測到人GITR⁺ T細胞。

 

B-hPD-1 / GITR小鼠的白細胞亞群分析

  

脾臟白細胞亞群分析

 

從C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠（n=3）中分離出脾細胞。通過流式細胞術測試白細胞亞群的比例。 

結果表明，純合B-hPD-1/GITR小鼠中白細胞亞群的表達譜與C57BL/6小鼠相似，hPD-1/hGITR的人源化不影響T，B，NK，單核細胞，DC和巨噬細胞的分化。

血液常規測試

 

 

血液常規測試

 

收集來自C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠（n=3）的血液，并通過血液常規測試進行分析。結果，MCV中的C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠之間存在顯著差異。

 

血液生化測試

   

測試了C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠的血清AST/ALT水平（n=3）。結果表明，C57BL/6和B-hPD-1/GITR小鼠之間沒有顯著差異。

 

PD-1 Ab聯合治療與GITR Ab療效評估-1

   

將鼠結腸癌MC38-hPD-L1細胞皮下植入純合B-hPD-1/hGITR小鼠中。當腫瘤大小為大約100-150mm³（n＝5）時，將小鼠分組。與對照組相比，所有實驗組均顯示出明顯的抑制作用。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。 

 

PD-1 Ab聯合治療與GITR Ab療效評估-2

   

將鼠結腸癌MC38-hPD-L1細胞皮下植入純合B-hPD-1/hGITR小鼠中。當腫瘤大小為大約100-150mm³（n＝5）時，將小鼠分組。與對照組相比，所有實驗組均顯示出明顯的抑制作用。（A）腫瘤平均體積±SEM，（B）小鼠平均體重±SEM。

 

參考資料

Ethan M Shevach, Geoffrey L. The GITR–GITRL interaction: co-stimulation or contrasuppression of regulatory activity?  Nature Reviews Immunology 6: 613–618 (2006)，dol:10: 1038/nri1867