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報告基因分類及優缺點介紹

瀏覽次數:6658 發布日期:2016-5-9  來源:南京厚百電子商務有限公司

報告基因(reporter gene)是一種編碼可被檢測的蛋白質或酶的基因,其表達產物非常容易被鑒定。把它的編碼序列和基因調節序列相融合,在調控序列控制下進行表達,從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控。

作為報告基因必須具備的條件:

(1)全序列已測定

(2)表達產物在手提細胞中不存在,即無背景,在被轉染的細胞中無相似的內源性表達產物

(3)其表達產物能夠進行定量測定

報告基因的種類很多,根據對其表達產物的分析檢測方法的不同,可將其分為體外報告基因和體內報告基因。前者的分析需要在含有報告分子的細胞裂解液或細胞、組織培養液(分泌型報告基因)中進行報告分子的定量。較典型的有氯霉素乙酰基轉移酶基因(CAT)、人生長激素基因(hGH)及分泌型堿性磷酸酶基因(SEAP)等。后者的分析可以在活的細胞或組織中,或在已經組化固定的組織或細胞中進行。較典型的如綠色熒光蛋白基因(GFP)。而β-半乳糖苷酶基因(β-Gal)和螢火蟲熒光素酶基因既可以在體外分析也可以在體內分析。

常用的報告基因系統:

√ 半乳糖苷酶報告系統

√ 熒光素酶報告系統

√ 熒光蛋白報告系統:

綠色熒光蛋白(GFP)

    可溶性蛋白,性質穩定;

    熒光基團相當明亮;

    熒光在活細胞中即可觀察,不需要固定和組織加工;

    GFP基團和目的基因做成融合蛋白后,可以通過轉染的方法在細胞中穩定表達;

    表達GFP融合物的細胞能夠在生活狀態進行實驗和檢測。

報告基因

優點

缺點

氯霉素乙酰轉移酶基因 (CAT)

在哺乳動物中沒有內源性活性;可用自動化的ELISA方法檢測

線性范圍窄;靈敏度相對較低;需要使用放射性同位素

β-半乳糖苷酶基因(β-Gal)

蛋白穩定;生物或化學發光檢測靈敏;不需要使用同位素

在哺乳動物細胞中有內源性活性

人生長激素基因(hGH)

屬于分泌型報告蛋白;操作簡便

靈敏度相對較低;線性范圍較窄

分泌型堿性磷酸酶基因(SEAP)

化學發光檢測法非常靈敏;線性范圍較寬;價格便宜

在某些細胞中具有內源性表達;與篩選的化合物相互干擾

熒光素酶基因(Luciferase)

靈敏性好;線性范圍寬;沒有內源性表達;測定方法簡便

蛋白的半衰期較短;常規分析重復性差       

綠色熒光蛋白基因(GFP)

自發熒光(不需要底物);沒有內源性表達;有多種突變體可應用

需要翻譯后加工;敏感性較低(沒有信號的放大) 

發布者:南京厚百電子商務有限公司
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