Molecular Devices在細(xì)胞成像系統(tǒng)上檢測細(xì)胞活性或毒性

EarlyTox™細(xì)胞完整性試劑盒由一系列易于識別活細(xì)胞和死細(xì)胞的優(yōu)化試劑組成�？捎糜跈z測不同處理對細(xì)胞活性的影響，也可評估不同機制產(chǎn)生的細(xì)胞毒性，包括凋亡和壞死。該試劑盒設(shè)計工作于多種細(xì)胞類型，貼壁和懸浮均可。簡單的操作流程和優(yōu)異的試劑表現(xiàn)使其能應(yīng)用到高通量掃描上。

試劑盒中使用了兩種結(jié)合DNA的熒光染料，一種為細(xì)胞膜可穿透的活細(xì)胞紅色染料，一種為細(xì)胞膜不可穿透的死細(xì)胞綠色染料。紅色染料可進(jìn)入所有細(xì)胞的細(xì)胞核，細(xì)胞膜是否完整對其無影響，并可被激發(fā)產(chǎn)生亮紅色熒光信號。綠色染料只能進(jìn)入死細(xì)胞并產(chǎn)生亮綠色熒光，此類細(xì)胞的細(xì)胞膜已不完整(圖1)。因此，活細(xì)胞和死細(xì)胞能通過成像系統(tǒng)拍攝到的熒光信號被輕易區(qū)分和識別到。

SpectraMax™ MiniMax™ 300細(xì)胞成像系統(tǒng)和SoftMax® Pro軟件為EarlyTox細(xì)胞完整性試劑盒的應(yīng)用提供了成像和數(shù)據(jù)分析的整套硬件軟件工具。使用儀器的雙通道熒光成像功能以及軟件的單細(xì)胞分析功能，可在5分鐘內(nèi)分析一塊96孔板細(xì)胞活性。

特點

信號強，縮短曝光時間，成像速度更快

適用于各種細(xì)胞類型，應(yīng)用廣泛

拍照和分析一體完成，流程簡化

方法

HeLa細(xì)胞以5000個/孔的密度接種到黑壁底透384孔板，培養(yǎng)24小時使其貼壁并生長，然后孔中加入具細(xì)胞毒性的藥物。藥物處理24小時候，按照試劑盒說明書加入染料標(biāo)記后檢測細(xì)胞活性。操作方法應(yīng)盡量均一，以減少移除培養(yǎng)基、沖洗步驟造成的細(xì)胞損失和結(jié)果不準(zhǔn)確性�？蛇x的遮蔽試劑能用于減少培養(yǎng)基或待測藥物產(chǎn)生的背景值。

結(jié)果

采用SpectraMax MiniMax 300細(xì)胞成像系統(tǒng)的綠色(541nm發(fā)射)和紅色(713nm發(fā)射)通道對384孔進(jìn)行高通量細(xì)胞成像(圖2A)。對紅色通道成像的圖片設(shè)置物體大小和熒光閾值，軟件的目標(biāo)識別功能可自動識別每張圖片中的所有細(xì)胞核。然后通過區(qū)分只標(biāo)記紅色的細(xì)胞核與同時標(biāo)記紅色綠色的細(xì)胞核，軟件的分類功能將自動識別計數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)胞(圖2B)。最后可輸出一系列詳細(xì)數(shù)據(jù)，例如每孔中活細(xì)胞占總細(xì)胞百分比。SoftMax Pro軟件可進(jìn)行4參數(shù)擬合得到有關(guān)藥物濃度與細(xì)胞活性的IC50曲線(圖3)。

結(jié)論

同時使用SpectraMax MiniMax細(xì)胞成像系統(tǒng)和EarlyTox細(xì)胞完整性試劑盒可以通過熒光成像快速方便準(zhǔn)確地檢測到死細(xì)胞和活細(xì)胞數(shù)目。各種細(xì)胞機制導(dǎo)致的細(xì)胞毒性均可被識別和定量。SoftMax Pro軟件既可區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞的不同染色模式，還可自動對數(shù)據(jù)進(jìn)行曲線擬合，無需復(fù)雜的數(shù)據(jù)導(dǎo)入導(dǎo)出，節(jié)約了數(shù)據(jù)分析處理時間。